發(fā)布時(shí)間：2017-06-12 16:05

  本文關(guān)鍵詞：小鼠CX3CR1基因慢病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建小鼠CX3CR1基因的慢病毒過表達(dá)載體。 方法：采用Oligo核酸軟件對Genbank上發(fā)表的小鼠cx3cr1mRNA序列進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)一對分別含有Age I、BamH I酶切位點(diǎn)的CX3CR1基因上下游引物，，PCR擴(kuò)增出該基因的全序列cDNA，將其定向克隆入pUbi-MSC-EGFP多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP慢病毒表達(dá)載體。再通過氨芐青霉素抗性篩選、陽性轉(zhuǎn)化子PCR鑒定，選取正確的克隆進(jìn)行測序鑒定。重組慢病毒載體構(gòu)建成功后,應(yīng)用慢病毒包裝質(zhì)粒pHelper1.0,pHelper2.0及Lipofectamine2000共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得病毒液，通過RT-PCR檢測細(xì)胞中EGFP表達(dá)水平變化并計(jì)算病毒滴度。 結(jié)果：PCR及測序結(jié)果表明目的基因序列克隆正確，成功構(gòu)建了含有小鼠CX3CR1基因的重組表達(dá)載體，并包裝成為慢病毒，獲得滴度為2×10~8TU/ml的病毒液。 結(jié)論：本課題成功構(gòu)建慢病毒過表達(dá)載體pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP，及滴度為2×108TU/ml的LV-CX3CR1-EGFP慢病毒液。為下一步研究慢病毒介導(dǎo)的CX3CR1基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其歸巢能力的作用奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：CX3CR1 趨化因子 慢病毒載體
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9
• 1 材料與方法9-20
• 2 結(jié)果20-23
• 3 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 文獻(xiàn)綜述27-41
• 參考文獻(xiàn)34-41
• 致謝41-42
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文42-43

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王培園;李結(jié);朱興全;楊桂連;袁子國;;重組病毒載體研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2012年03期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠CX3CR1基因慢病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：444399