本文關(guān)鍵詞：人源抗發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒-Gn蛋白重組抗體的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為研制人源抗發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重組抗體,本研究利用噬菌體表面展示技術(shù),以SFTSV全病毒顆粒和重組表達(dá)SFTSV-Gn蛋白為抗原,從人源抗SFTSV Fab噬菌體抗體庫(kù)中篩選抗SFTSV-Gn蛋白的重組Fab抗體,通過(guò)ELISA對(duì)Fab抗體的結(jié)合特異性進(jìn)行檢測(cè)。將Fab抗體基因克隆入哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體HL51-14,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得分泌表達(dá)的IgG抗體。通過(guò)ELISA、IFA和Western-blotting檢測(cè)IgG抗體的結(jié)合特異性。采用親和層析純化IgG抗體,并用微量中和試驗(yàn)檢測(cè)IgG抗體的中和活性。結(jié)果表明經(jīng)過(guò)三輪富集篩選,以SFTSV病毒顆粒為抗原篩選出364株針對(duì)SFTS病毒核蛋白Fab抗體,沒(méi)有篩選出特異性結(jié)合Gn蛋白的陽(yáng)性克隆,而通過(guò)Gn蛋白篩選得到8株特異結(jié)合Gn蛋白的Fab抗體,其中5株來(lái)自Lambda庫(kù),3株來(lái)自Kappa庫(kù)。ELISA、IFA和Western-blotting檢測(cè)證實(shí)這8株IgG抗體均能特異性結(jié)合Gn蛋白。微量中和試驗(yàn)顯示8株新篩抗體沒(méi)有中和活性,但仍可為后續(xù)SFTSV人源單克隆抗體的研究提供借鑒和參考。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué);中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所;
【關(guān)鍵詞】： 噬菌體抗體庫(kù) 重組抗體 發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒
【基金】：重大新藥創(chuàng)制(2013ZX09304103001006)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 自2007年以來(lái),中國(guó)多個(gè)省市出現(xiàn)高度散發(fā)發(fā)熱伴血小板減少綜合征病例,通過(guò)解析全基因序列,確定為布尼亞病毒科白嶺病毒屬的一種新病毒,命名為發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒[1]。長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)同屬白蛉病毒屬(Phlebovirus)的裂谷熱病毒(RVFv)研究表明,糖蛋白對(duì)布尼亞病毒在高

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本文編號(hào)：442954