本文關(guān)鍵詞：重組人博卡病毒VP2病毒樣顆粒免疫原性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)的廣泛傳播已經(jīng)嚴(yán)重影響到人類特別是兒童的生命健康。本課題旨在研究HBoV1和HBoV2的病毒蛋白2(viral protein2,VP2)病毒樣顆粒(virus-like particles, VLPs)的免疫原性,及免疫途徑和免疫佐劑對(duì)病毒樣顆粒免疫原性的影響,探討HBoV VP2VLPs作為疫苗的可能性。 方法：通過重組桿狀病毒感染草地夜蛾細(xì)胞(Spodoptera Frugiperda9.SF9)表達(dá)HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs,經(jīng)氯化銫(Cesium Chloride,CsC1)不連續(xù)密度梯度離心純化獲得高純度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs。分別于實(shí)驗(yàn)第0、3、6w用15μg HBoV1VP2VLPs或HBoV2VP2VLPs加或者未加明礬佐劑,通過肌內(nèi)注射(intramuscular injection, IM)或皮內(nèi)注射(intracutaneous injection,ID)途徑免疫小鼠,實(shí)驗(yàn)第8w收集小鼠血清及脾臟淋巴組織。探索酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(Enzyme-linked immunospot, ELISPOT)檢測(cè)HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)最佳實(shí)驗(yàn)條件,并檢測(cè)HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)度；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法檢測(cè)血清特異性IgG抗體效價(jià),綜合評(píng)價(jià)HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs的免疫原性。從細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)度、IgG抗體效價(jià)與IgG抗體活性三方面,分析免疫途徑和免疫佐劑對(duì)其免疫原性的影響,尋找最佳的免疫途徑和免疫佐劑,并探討HBoV1和HBoV2免疫血清的交叉反應(yīng)。 結(jié)果： 1、多肽P3(GYIPIENEL)及P5(LYQMPFFLL)為HBoV1特異性T細(xì)胞表位,P8(GYIPVIHEL)為HBoV2特異性T細(xì)胞表位； 2、檢測(cè)HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的ELISPOT的最佳實(shí)驗(yàn)條件為：培養(yǎng)時(shí)間為24h,小鼠脾臟淋巴細(xì)胞濃度為5×105細(xì)胞/孔,特異性刺激多肽濃度為10μg/ml； 3、在特異性多肽的刺激下,HBoVl實(shí)驗(yàn)組特異性分泌IFN-y的細(xì)胞數(shù)為(178+53)/106細(xì)胞,HBoV2實(shí)驗(yàn)組特異性分泌IFN-y的細(xì)胞數(shù)為(156+50)/106細(xì)胞,與對(duì)照組比較兩者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001) 4、HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高效價(jià)特異性IgG抗體(HBoV1實(shí)驗(yàn)組1:620000, HBoV2實(shí)驗(yàn)組1：380000)。同樣劑量的HBoV1VP2VLPs免疫后小鼠血清IgG效價(jià)高于HBoV2VP2VLPs免疫后小鼠血清|gG效價(jià)p0.01)；HBoV1VP2VLPs免疫血清IgG活性系數(shù)為(58+12)%,HBoV2VP2VLPs免疫血清IgG活性系數(shù)為(62+7)%,均大于50%,兩者之間無顯著性差異(p0.05)； 5. HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs通過肌內(nèi)注射或皮內(nèi)注射免疫誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)度、血清IgG效價(jià)和IgG活性均無顯著性差異(p0.05)； 6、明礬佐劑降低HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)度(p0.001),增強(qiáng)HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)的血清IgG效價(jià)(p0.05)和IgG活性p0.01)。 結(jié)論： 1、成功獲得高純度HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs; 2、首次獲得2條HBoV1小鼠特異性T細(xì)胞表位多肽和1條HBoV2小鼠特異性T細(xì)胞表位多肽,并確定ELISPOT檢測(cè)人博卡病毒VP2病毒樣顆粒誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)最佳實(shí)驗(yàn)條件； 3、HBoV1VP2VLPs和HBoV2VP2VLPs能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng),具有很好的免疫原性,可用于疫苗的研究； 4、肌內(nèi)注射和皮內(nèi)注射途徑對(duì)HBoV VP2VLPs免疫原性無影響,肌內(nèi)注射更便捷； 5、明礬佐劑使HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)增強(qiáng),使HBoV VP2VLPs誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)減弱。HBoV VP2VLPs作為預(yù)防性疫苗使用時(shí)應(yīng)添加明礬佐劑,作為治療性疫苗使用時(shí)應(yīng)不加明礬佐劑。
【關(guān)鍵詞】：人博卡病毒(HBoV) 病毒蛋白2(VP2) 病毒樣顆粒(VLPs) 免疫原性
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第一章 引言12-15
• 第二章 材料和方法15-33
• 2.1 材料15-22
• 2.1.1 細(xì)胞及重組桿狀病毒15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.3 主要試劑15-17
• 2.1.4 主要溶液的配制17-20
• 2.1.5 主要儀器和耗材20-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-33
• 2.2.1 HBoV VP2 VLPs表達(dá)純化及鑒定22-26
• 2.2.2 ELISPOT檢測(cè)HBoV VP2 VLPs特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)最佳實(shí)驗(yàn)條件選擇26-28
• 2.2.3 HBoV VP2 VLPs免疫原性研究28-32
• 2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理32-33
• 第三章 結(jié)果33-46
• 3.1 HBoV VP2 VLPs鑒定33-34
• 3.1.1 HBoV VP2 VLPs純度鑒定33
• 3.1.2 HBoV VP2 VLPs形態(tài)鑒定33-34
• 3.1.3 HBoV VP2 VLPs蛋白定量34
• 3.2 ELISPOT檢測(cè)HBoV VP2 VLPs特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)最佳實(shí)驗(yàn)條件選擇34-39
• 3.2.1 HBoV1和HBoV2特異性刺激多肽生物信息學(xué)預(yù)測(cè)34-35
• 3.2.2 ELISPOT試驗(yàn)結(jié)果35
• 3.2.3 HBoV1和HBoV2特異性刺激多肽的選擇35-36
• 3.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間選擇36-37
• 3.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)濃度選擇37-38
• 3.2.6 特異性刺激多肽濃度選擇38-39
• 3.3 HBoV VP2 VLPs免疫原性研究39-45
• 3.3.1 HBoV VP2 VLPs誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)39-40
• 3.3.2 HBoV VP2 VLPs誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫反應(yīng)40-41
• 3.3.3 免疫途徑對(duì)HBoV VP2 VLPs免疫原性的影響41-43
• 3.3.4 明礬佐劑對(duì)HBoV VP2 VLPs免疫原性的影響43-45
• 3.4 HBoV VLPs免疫血清交叉反應(yīng)45-46
• 第四章 分析與討論46-52
• 第五章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 綜述60-70
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 英文縮寫詞表70-72
• 攻讀碩士期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文及參與課題72-74
• 致謝74-75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 魏e

本文編號(hào)：434151