本文關(guān)鍵詞：人外分泌汗腺細(xì)胞分離方法的優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:優(yōu)化人外分泌汗腺細(xì)胞的分離方法,以高效地提取外分泌汗腺細(xì)胞。方法:新鮮的皮膚樣本剪成組織微粒(大小約1 mm3),A組采用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)和膠原酶Ⅱ型(2 mg/ml)體積分?jǐn)?shù)1∶1混合的方法;B組采用傳統(tǒng)消化方法,即膠原酶Ⅱ型;C組采用胰蛋白酶-EDTA消化的方法,三組同時(shí)置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),比較三種方法處理后汗腺細(xì)胞團(tuán)的獲取情況。將挑取的汗腺細(xì)胞團(tuán)種于培養(yǎng)皿內(nèi),觀察細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)情況,并用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞的增殖指數(shù),最后進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)汗腺細(xì)胞標(biāo)志性蛋白的表達(dá)。結(jié)果:A組和C組在消化30 min后,鏡下可見(jiàn)少部分的汗腺細(xì)胞團(tuán),2 h后A組游離汗腺細(xì)胞團(tuán)明顯增多,C組游離汗腺細(xì)胞團(tuán)很少;B組在消化6 h后,才出現(xiàn)部分游離的汗腺細(xì)胞團(tuán)。將汗腺細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)3 d后發(fā)現(xiàn)C組汗腺細(xì)胞貼壁情況差、成活細(xì)胞少;A組和B組的汗腺細(xì)胞貼壁情況良好,培養(yǎng)9 d后呈"鋪路石樣"生長(zhǎng),細(xì)胞增殖指數(shù)分別為(18±4)%和(17±6)%,無(wú)明顯差異,免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明:兩組細(xì)胞癌胚抗原(CEA)和細(xì)胞角蛋白7(CK7)表達(dá)均為陽(yáng)性。結(jié)論:胰蛋白酶-EDTA和Ⅱ型膠原酶聯(lián)合消化法能明顯縮短汗腺細(xì)胞的分離時(shí)間,且不影響細(xì)胞的活性和增殖特性。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué);解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院 全軍創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院急診科;
【關(guān)鍵詞】： 汗腺 胰蛋白酶 膠原酶
【基金】：國(guó)家973計(jì)劃資助項(xiàng)目(2012CB518105) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81121004,81230041,81171798)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 皮膚是人體最大的器官,在抵御外界損傷,維持體溫穩(wěn)定,平衡物質(zhì)代謝等方面起著重要的作用[1,2]。作為皮膚附屬器的汗腺,在大面積深度燒傷患者中常常受到嚴(yán)重?fù)p傷,損傷部位分泌排汗、調(diào)節(jié)體溫的功能喪失,這給患者帶來(lái)極大的痛苦。目前,汗腺修復(fù)再生方面的研究,主要是誘導(dǎo)多能干

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 唐s

本文編號(hào)：431004