本文關(guān)鍵詞：人精子甘露糖受體的分子定性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用不同方法判斷人精子甘露糖受體（hsMR）的存在，并通過(guò)親和層析技術(shù)分離純化該受體，同時(shí)探討其與血清淀粉樣蛋白P成分（SAP）、HSP70家族分子（HSP70、HSPA2、HSC70），以及人巨噬細(xì)胞甘露糖受體（CD206）的關(guān)系，旨在明確該受體分子特性，為進(jìn)一步研究其在人類(lèi)受精中的作用奠定基礎(chǔ)。 方法：收集正常人精子，提取人精子全蛋白；以DMA為探針，進(jìn)行Dot-Blot和Western Blot實(shí)驗(yàn)，并用DMA-FITC標(biāo)記結(jié)合人精子蛋白后的甘露糖-瓊脂糖凝膠顆粒（mannose-Sepharose4B）（簡(jiǎn)稱(chēng)DM-beads，以下同）；利用親和層析技術(shù)分離純化人精子甘露糖受體；分別用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70和CD206的抗體為探針標(biāo)記結(jié)合人精子蛋白后的DM-beads，并用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70的抗體在不同狀態(tài)人精子進(jìn)行原位熒光標(biāo)記。 結(jié)果：Dot-Blot和Western Blot以及DMA-FITC標(biāo)記結(jié)合人精子蛋白后的DM-beads結(jié)果均顯示人精子蛋白中存在hsMR能與DMA特異性結(jié)合；WesternBlot結(jié)果顯示獲能人精子蛋白中hsMR分子量約為72KDa。親和層析柱填料電泳銀染出現(xiàn)多條細(xì)密條帶，提示人精子中不止一種蛋白質(zhì)分子能與甘露糖結(jié)合。不同探針標(biāo)記結(jié)合洗滌去精漿人精子蛋白、獲能人精子蛋白合后的DM-beads顯示，人精子蛋白中存在HSP70、HSPA2和HSC70，且均具有DM結(jié)合活性.此外，anti-SAP標(biāo)記結(jié)合洗滌去精漿人精子蛋白后DM-beads出現(xiàn)綠色熒光，而結(jié)合獲能人精子蛋白后DM-beads幾乎未見(jiàn)綠色熒光，表明SAP存在于洗滌去精漿精子蛋白中，獲能人精子蛋白中SAP標(biāo)記陰性；anti-CD206-Biotin標(biāo)記結(jié)合人精子蛋白后DM-beads均未見(jiàn)有特異性熒光出現(xiàn)，表明人精子蛋白中不存在CD206分子。不同探針標(biāo)記不同狀態(tài)人精子顯示，SAP存在于新鮮洗滌人精子表面，定位于尾部；HSP70主要見(jiàn)于頂體反應(yīng)后人精子頸-中段；HSPA2在獲能人精子頸-中段可見(jiàn)，在頂體反應(yīng)后精子多見(jiàn)于赤道段和頂體后區(qū)，可見(jiàn)典型bar狀結(jié)構(gòu)，頸段隱約可見(jiàn)；HSC70主要見(jiàn)于赤道段和頂體后區(qū)，可見(jiàn)典型bar狀結(jié)構(gòu)，頸段隱約可見(jiàn)，偶見(jiàn)全頭部表達(dá)。 結(jié)論：人精子甘露糖受體（hsMR）是人精子中具有甘露糖結(jié)合活性的蛋白質(zhì)，至少包含兩類(lèi)分子：（1）血清淀粉樣蛋白P成分（SAP）；（2）熱休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。分布于人射出精液中的精子尾部的hsMR，主要成分是SAP。在精子獲能過(guò)程中SAP被去除，因此判斷其為精子尾的表在蛋白；分布于人精子頭部至精子尾中段的hsMR，主要成分是熱休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。其中，HSP70主要分布于頂體反應(yīng)后精子的頸-中段；HSPA2主要分布于獲能精子頸-中段和頂體反應(yīng)后精子頭赤道段及（或）頂體后區(qū)；HSC70主要分布于頂體反應(yīng)后精子頭的赤道段及或頂體后區(qū)，提示HSPA2和HSC70可能在受精中有重要作用。人精子中不存在CD206蛋白（人巨噬細(xì)胞甘露糖受體，hmMR），證明hsMR雖然與hmMR一樣具有甘露糖結(jié)合活性，但兩者不是同一種分子。本研究關(guān)于hsMR與HSP70家族分子關(guān)系的發(fā)現(xiàn)國(guó)際上尚未見(jiàn)報(bào)道。
【關(guān)鍵詞】：人精子 甘露糖受體 SAP HSP70家族分子 CD206
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 第Ⅰ部分 人精子蛋白提取及粗提蛋白中 hsMR 的檢測(cè)13-31
• 實(shí)驗(yàn) 1 人精子蛋白粗提及 hsMR 的檢測(cè)13-25
• 實(shí)驗(yàn) 2 hsMR 結(jié)合活性的 DM-beads 實(shí)驗(yàn)25-29
• 討論29-31
• 第Ⅱ部分 親和層析法分離純化人精子甘露糖受體31-35
• 第Ⅲ部分 人精子中 hsMR 與 HSP70 家族分子、SAP 及 CD206 的關(guān)系探討35-59
• 實(shí)驗(yàn) 1 hsMR 與相關(guān)候選分子的 DM-beads 交叉標(biāo)記實(shí)驗(yàn)35-49
• 實(shí)驗(yàn) 2 hsMR 及相關(guān)候選分子在不同狀態(tài)人精子的原位熒光標(biāo)記49-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 綜述 人精子甘露糖受體的研究進(jìn)展及展望64-73
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 江澍;林典梁;江一平;;抗人精子甘露糖受體抗血清對(duì)精子穿透實(shí)驗(yàn)的影響[J];解剖學(xué)報(bào);2007年06期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張艷;人精子甘露糖受體不同探針標(biāo)記的比較研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 林典梁;人精子甘露糖受體純化及其對(duì)受精能力的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2002年

3 江澍;人精子甘露糖受體對(duì)精卵融合的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2002年

4 劉志春;人精子甘露糖受體的純化及其肽質(zhì)量指紋譜鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：人精子甘露糖受體的分子定性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：428938