人精子甘露糖受體的分子定性研究

發(fā)布時間：2017-06-07 12:00

本文關(guān)鍵詞：人精子甘露糖受體的分子定性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用不同方法判斷人精子甘露糖受體（hsMR）的存在，并通過親和層析技術(shù)分離純化該受體，同時探討其與血清淀粉樣蛋白P成分（SAP）、HSP70家族分子（HSP70、HSPA2、HSC70），以及人巨噬細胞甘露糖受體（CD206）的關(guān)系，旨在明確該受體分子特性，為進一步研究其在人類受精中的作用奠定基礎。方法：收集正常人精子，提取人精子全蛋白；以DMA為探針，進行Dot-Blot和Western Blot實驗，并用DMA-FITC標記結(jié)合人精子蛋白后的甘露糖-瓊脂糖凝膠顆粒（mannose-Sepharose4B）（簡稱DM-beads，以下同）；利用親和層析技術(shù)分離純化人精子甘露糖受體；分別用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70和CD206的抗體為探針標記結(jié)合人精子蛋白后的DM-beads，并用DMA-FITC以及SAP、HSP70、HSPA2、HSC70的抗體在不同狀態(tài)人精子進行原位熒光標記。結(jié)果：Dot-Blot和Western Blot以及DMA-FITC標記結(jié)合人精子蛋白后的DM-beads結(jié)果均顯示人精子蛋白中存在hsMR能與DMA特異性結(jié)合；WesternBlot結(jié)果顯示獲能人精子蛋白中hsMR分子量約為72KDa。親和層析柱填料電泳銀染出現(xiàn)多條細密條帶，提示人精子中不止一種蛋白質(zhì)分子能與甘露糖結(jié)合。不同探針標記結(jié)合洗滌去精漿人精子蛋白、獲能人精子蛋白合后的DM-beads顯示，人精子蛋白中存在HSP70、HSPA2和HSC70，且均具有DM結(jié)合活性.此外，anti-SAP標記結(jié)合洗滌去精漿人精子蛋白后DM-beads出現(xiàn)綠色熒光，而結(jié)合獲能人精子蛋白后DM-beads幾乎未見綠色熒光，表明SAP存在于洗滌去精漿精子蛋白中，獲能人精子蛋白中SAP標記陰性；anti-CD206-Biotin標記結(jié)合人精子蛋白后DM-beads均未見有特異性熒光出現(xiàn)，表明人精子蛋白中不存在CD206分子。不同探針標記不同狀態(tài)人精子顯示，SAP存在于新鮮洗滌人精子表面，定位于尾部；HSP70主要見于頂體反應后人精子頸-中段；HSPA2在獲能人精子頸-中段可見，在頂體反應后精子多見于赤道段和頂體后區(qū)，可見典型bar狀結(jié)構(gòu)，頸段隱約可見；HSC70主要見于赤道段和頂體后區(qū)，可見典型bar狀結(jié)構(gòu)，頸段隱約可見，偶見全頭部表達。結(jié)論：人精子甘露糖受體（hsMR）是人精子中具有甘露糖結(jié)合活性的蛋白質(zhì)，至少包含兩類分子：（1）血清淀粉樣蛋白P成分（SAP）；（2）熱休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。分布于人射出精液中的精子尾部的hsMR，主要成分是SAP。在精子獲能過程中SAP被去除，因此判斷其為精子尾的表在蛋白；分布于人精子頭部至精子尾中段的hsMR，主要成分是熱休克蛋白70家族分子（HSP70、HSPA2和HSC70）。其中，HSP70主要分布于頂體反應后精子的頸-中段；HSPA2主要分布于獲能精子頸-中段和頂體反應后精子頭赤道段及（或）頂體后區(qū)；HSC70主要分布于頂體反應后精子頭的赤道段及或頂體后區(qū)，提示HSPA2和HSC70可能在受精中有重要作用。人精子中不存在CD206蛋白（人巨噬細胞甘露糖受體，hmMR），證明hsMR雖然與hmMR一樣具有甘露糖結(jié)合活性，但兩者不是同一種分子。本研究關(guān)于hsMR與HSP70家族分子關(guān)系的發(fā)現(xiàn)國際上尚未見報道。
【關(guān)鍵詞】：人精子 甘露糖受體 SAP HSP70家族分子 CD206
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R321.1
【目錄】：