本文關(guān)鍵詞：新型小分子免疫抑制劑艾拉莫德對人類樹突狀細(xì)胞分化成熟的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：艾拉莫德(iguratimod，T-614)是用于治療成人活動性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的1類新藥。前期功能研究提示它能抑制IFN-γ、IL-1、IL-6、TNF-a等細(xì)胞因子，免疫球蛋白(IgM、IgG)的產(chǎn)生并選擇性抑制COX-2，可能通過NF-κB信號通路抑制和降低炎癥反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells，DCs）能啟動初始免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)免疫耐受，是治療自身免疫性疾病的重要突破口。國內(nèi)外暫未見艾拉莫德對DCs的功能的研究。本實(shí)驗(yàn)旨在探討艾拉莫德對健康人外周血DCs的分化和成熟的影響。 方法：本課題采用密度梯度離心法（區(qū)帶離心法）和貼壁法建立人類外周血單核細(xì)胞分化的DCs體外培養(yǎng)體系，采用噻唑藍(lán)比色（MTT）法檢測艾拉莫德不同濃度作用后對樹突狀細(xì)胞的存活率的影響，流式細(xì)胞術(shù)測定艾拉莫德作用后樹突狀細(xì)胞表面分子的表達(dá)。應(yīng)用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）的方法檢測受艾拉莫德作用后的樹突狀細(xì)胞對淋巴細(xì)胞的刺激增殖能力。進(jìn)一步檢測艾拉莫德對DCs分泌細(xì)胞因子IL-12的影響，驗(yàn)證艾拉莫德對DCs功能的作用。 結(jié)果： 1.倒置相差顯微鏡下觀察樹突狀細(xì)胞的形態(tài)，iDCs大部分貼壁，表面突起較少細(xì)胞多呈現(xiàn)較小的圓形，可見大部分的細(xì)胞聚集貼壁。脂多糖刺激24h后再觀察，細(xì)胞體積增大呈圓形或橢圓形，表面可見許多不規(guī)則樹突狀突起,大部分懸浮為典型的mDC形態(tài)。經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)檢測，iDCs表面低表達(dá)CD86和CD83， CD86陽性數(shù)占10.7%、CD83占17.2%，而高表達(dá)HLA-DR和CD80，HLA-DR陽性數(shù)占89.8%、CD8092.1%，經(jīng)LPS刺激24h后，iDCs向mDC發(fā)展，CD86陽性數(shù)占為78.7%、CD83占84.7%，較未成熟細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增高。 2.不同濃度艾拉莫德（50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml、200ug/、250ug/ml）作用于DCs細(xì)胞，經(jīng)MTT法檢測DCs的存活率80%。隨著艾拉莫德濃度的增加作用于DCs，觀察其形態(tài)與正常對照組相比，體積變小更圓，貼壁細(xì)胞增多，表面的樹突較少，表明實(shí)驗(yàn)濃度作用下樹突狀細(xì)胞呈非成熟狀態(tài)。艾拉莫德的濃度在200ug/ml、250ug/ml時作用于iDCs≥3h，再予LPS刺激細(xì)胞成熟，流式細(xì)胞儀檢測樹突狀細(xì)胞表面分子，CD86陽性數(shù)占19.3%與16.0%，較正常成熟細(xì)胞的陽性數(shù)明顯下降。與其他濃度組CD86的陽性數(shù)有顯著性差異，與其他表面分子的陽性數(shù)也有顯著性差異。 3.艾拉莫德濃度為50ug/ml作用于樹突狀細(xì)胞，3h后LPS刺激細(xì)胞成熟，再與同種異體淋巴細(xì)胞1：1混合培養(yǎng)，，其OD值最大為0.6536。同種試驗(yàn)方法，各個濃度組間、比例組間分別有極顯著差異（p0.01）。不同濃度艾拉莫德作用于DCs后，在濃度為250ug/ml時樹突狀細(xì)胞分泌IL-12的表達(dá)量最低，為5.7pg/ml，在濃度為50ug/ml時最高，為222.3pg/ml。 結(jié)論： 1.艾拉莫德能夠劑量依賴性的改變?nèi)祟悊魏思?xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞的形態(tài)。 2.艾拉莫德濃度為200ug/ml及250ug/ml時作用于樹突狀細(xì)胞的時間≥3h，樹突狀細(xì)胞表面受體CD86的表達(dá)明顯下降，艾拉莫德對DCs表達(dá)CD86抑制作用。 3.樹突狀細(xì)胞與同種異體淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，淋巴細(xì)胞的增殖能力與艾拉莫德的濃度相關(guān)。 4.艾拉莫德可呈劑量依賴性的抑制樹突狀細(xì)胞分泌IL-12。
【關(guān)鍵詞】：樹突狀細(xì)胞 艾拉莫德 表面分子 IL-12
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表6-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 DCs 的體外培養(yǎng)15-25
• 2.1 引言15
• 2.2 材料與設(shè)備15-16
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料15
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 2.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 2.2.2.2 流式細(xì)胞檢測試劑16
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.3.1 主要溶液配制16-17
• 2.3.1.1 rhGM-CSF 細(xì)胞因子分裝16-17
• 2.3.1.2 rhIL-4 細(xì)胞因子分裝17
• 2.3.1.3 LPS 分裝17
• 2.3.1.4 10% FBS RPMI-1640 完全培養(yǎng)基的配制17
• 2.3.1.5 磷酸緩沖鹽 PBS 的配制17
• 2.3.2 健康人外周血 DCs 的體外分離培養(yǎng)17-18
• 2.3.3 細(xì)胞的形態(tài)和表型鑒定18-19
• 2.3.3.1 細(xì)胞的形態(tài)觀察18-19
• 2.3.3.2 DCs 表型的鑒定19
• 2.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析19-23
• 2.4.1 DCs 體外培養(yǎng)體系的建立19-23
• 2.4.1.1 正常 DCs 的形態(tài)觀察19-20
• 2.4.1.2 正常樹突狀細(xì)胞表型分析20-23
• 2.5 本章小結(jié)與討論23-25
• 第三章 艾拉莫德對樹突狀細(xì)胞的作用25-48
• 3.1 引言25-26
• 3.2 材料和設(shè)備26-27
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料26
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑26-27
• 3.2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)試劑26
• 3.2.2.2 流式細(xì)胞檢測試劑26
• 3.2.2.3 其他試劑26-27
• 3.2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備27
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法27-33
• 3.3.1 主要溶液配制27-29
• 3.3.1.1 rhGM-CSF 細(xì)胞因子分裝27-28
• 3.3.1.2 rhIL-4 細(xì)胞因子分裝28
• 3.3.1.3 LPS 分裝28
• 3.3.1.4 T-614 溶液28
• 3.3.1.5 DEX 溶液28
• 3.3.1.6 10% FBS RPMI-1640 完全培養(yǎng)基28
• 3.3.1.7 10% SDS 的配制28
• 3.3.1.8 MTT 溶液配制28-29
• 3.3.1.9 絲裂霉素 C 溶液的配制29
• 3.3.1.10 磷酸緩沖鹽 PBS 的配制29
• 3.3.2 試驗(yàn)流程圖29
• 3.3.3 MTT 法檢測細(xì)胞的存活率29-30
• 3.3.4 艾拉莫德對 DCs 作用的測定30
• 3.3.4.1 細(xì)胞的形態(tài)觀察30
• 3.3.4.2 細(xì)胞的表型鑒定30
• 3.3.5 混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)30-31
• 3.3.6 DCs 分泌細(xì)胞因子 IL-12 活力測定31-33
• 3.3.6.1 IL-12 ELISA 試劑盒試劑準(zhǔn)備31-32
• 3.3.6.2 IL-12 活力測定步驟32-33
• 3.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析33
• 3.4 結(jié)果與分析33-46
• 3.4.1 不同濃度艾拉莫德對 DCs 作用33-43
• 3.4.1.1 MTT 法檢測細(xì)胞活性34-35
• 3.4.1.2 不同濃度艾拉莫德及地塞米松作用后 DCs 的形態(tài)學(xué)觀察35-36
• 3.4.1.3 不同濃度艾拉莫德對細(xì)胞的表型的影響36-43
• 3.4.2 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)43-46
• 3.4.2.1 艾拉莫德作用后 DCs 刺激淋巴細(xì)胞的增殖的能力43-44
• 3.4.2.2 ELISA 試劑盒檢測細(xì)胞上清 IL-12 含量44-46
• 3.5 本章小結(jié)46-48
• 第四章 結(jié)論與展望48-49
• 4.1 結(jié)論48
• 4.2 展望48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 附錄53-63
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 舒強(qiáng);李興福;侯懷水;李棟;劉花香;;艾拉莫德對骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維樣細(xì)胞特性的影響[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2006年07期

2 滕佳臨;呂良敬;鮑春德;韓星海;孫凌云;徐建華;李興福;吳華香;;艾拉莫德治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎多中心隨機(jī)雙盲安慰劑對照研究[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2007年08期

3 葉偉勝;張鐵良;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎流行病學(xué)進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;2009年03期

4 唐軍民;張薇;;樹突狀細(xì)胞[J];解剖學(xué)報;1993年03期

5 張靜;袁玉;李健華;王源園;劉廣余;;艾拉莫德片在中國健康志愿者體內(nèi)的藥動學(xué)[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2007年04期

6 舒強(qiáng);李興福;劉花香;李棟;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維樣細(xì)胞增殖特性的體外研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年11期

7 焦志軍;王文紅;李晶;陳蕾;尤海燕;汪毅;周光炎;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個核細(xì)胞Notch及其配體表達(dá)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2007年06期

8 李幼平;樹突狀細(xì)胞與移植免疫耐受研究進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;1997年04期

9 陳蘊(yùn)穎,步宏;樹突狀細(xì)胞的表面標(biāo)志及其免疫學(xué)意義[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;1998年04期

10 高佩芳;姚茹冰;蔡輝;;樹突狀細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎免疫耐受治療中的作用[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2009年04期

  本文關(guān)鍵詞：新型小分子免疫抑制劑艾拉莫德對人類樹突狀細(xì)胞分化成熟的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：421195