本文關(guān)鍵詞：Cpn0147基因真核表達載體的構(gòu)建及在HeLa細胞中的表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建肺炎衣原體Cpn 0147基因真核表達重組質(zhì)粒,為進一步研究其與宿主相互作用的分子機制打下基礎(chǔ)。方法以Cpn AR39株基因組為模板,以Cpn0147全長編碼特異性引物進行PCR擴增;將Cpn0147基因插入至pcDNA3.1+/His/Myc載體,構(gòu)建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重組質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切及測序鑒定后轉(zhuǎn)染至HeLa細胞中,采用RT-PCR檢測重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況,采用免疫熒光法及Western blot檢測Cpn0147蛋白在細胞中的表達。試驗設(shè)pcDNA3.1+/His/Myc載體為陰性對照。結(jié)果從CpnAR39株基因組DNA中擴增出Cpn0147基因片段,大小466bp,經(jīng)雙酶切、連接、轉(zhuǎn)化、篩選,得到pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重組質(zhì)粒,序列測定證實與GenBank Cpn AR39株Cpn0147基因序列一致;RT-PCR擴增出Cpn0147基因,與理論大小一致;免疫熒光檢測重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后HeLa細胞胞漿觀察到紅色熒光,對照組無熒光;Western blot檢測到特異反應(yīng)條帶位于16kd,對照組無此條帶。結(jié)論成功構(gòu)建pcDNA3.1+/His/Myc-Cpn0147重組質(zhì)粒并在真核細胞內(nèi)表達Cpn0147蛋白,為進一步研究其分子生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)研究所臨床檢驗診斷學(xué)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 肺炎衣原體 Cpn 真核載體 間接免疫熒光 免疫沉淀
【基金】：河北省自然科學(xué)基金項目(No.C2014405041)
【分類號】：R374
【正文快照】： ***foundation for further study of the biological function of Cpn0147.衣原體(Chlamydia)是一類嚴(yán)格活細胞內(nèi)寄生、具有獨特二相發(fā)育周期的病原生物,肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae,Cpn)與沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,Ct)是衣原體屬中引起人類疾病的主要病原體[1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 代國知;馬忠夏;周安文;陳虹亮;吳移謀;;肺炎嗜衣原體Cpn0147重組蛋白的免疫學(xué)活性研究[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2012年14期

2 童偉;周淑芬;賈天軍;;肺炎衣原體感染兒童血清中抗Cpn0147抗體的檢測[J];臨床檢驗雜志;2012年04期

3 粟盛梅;李忠玉;黃秋林;鐘光明;周洲;陸春雪;;沙眼衣原體pORF8質(zhì)粒蛋白的表達及其單克隆抗體的制備與鑒定[J];中國病原生物學(xué)雜志;2013年02期

【共引文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 田穎新;酵母雙雜交技術(shù)篩選Cpn0147和Cpn0308配體的研究[D];河北北方學(xué)院;2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李忠玉;吳移謀;黃秋林;汪世平;鐘光明;;CT358蛋白在沙眼衣原體感染細胞中的定位及特性分析(英文)[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2009年05期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉鋼,王樹欣,楊新吉,胡翼云,江載芳,楊永弘;肺炎衣原體轉(zhuǎn)運、儲存及傳代條件的探討[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年03期

2 俞信忠,王卓英,吳滿武,許平,曾艷,鄭淑芳;335例兒童肺炎衣原體急性下呼吸道感染分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2004年11期

3 張陽根;張海艷;;肺炎衣原體研究進展[J];實驗與檢驗醫(yī)學(xué);2008年05期

4 龍寶光;;經(jīng)培養(yǎng)證實的肺炎衣原體所致肺炎[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊;1992年03期

5 Marrie T J ,李海潮;肺炎衣原體[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;1993年03期

6 羅憲玲;汪玎妍;蔣文玲;陳澤波;;套式PCR檢測新生兒肺炎衣原體[J];廣東醫(yī)學(xué);1996年03期

7 蘇明權(quán),穆士杰,馬越云,于文彬,丁振若;聚合酶鏈反應(yīng)檢測肺炎衣原體方法的建立與初步應(yīng)用[J];中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志;1997年04期

8 劉鋼,楊永弘,江載芳;肺炎衣原體研究現(xiàn)狀[J];中華兒科雜志;2001年08期

9 王亞娟,沈敘莊,佟月娟,姚德秀,燕潤菊,王春蓮,幺遠,劉鋼,Mikka Paldanius,Maija Leinonen,Heikki Peltola,楊永弘;肺炎衣原體在兒童急性下呼吸道感染中的情況[J];中華兒科雜志;2001年09期

10 張湘燕;肺炎衣原體與呼吸道感染性疾病[J];貴州醫(yī)藥;2002年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉卉;;肺炎衣原體與腦梗死關(guān)系的研究[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

2 陸小梅;;肺炎衣原體血清學(xué)檢測及臨床價值[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

3 儲德節(jié);胡志雄;余竹元;都勇;郭水根;潘春峰;王靜;周海英;;建立動物模型探討肺炎衣原體致肺癌作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

4 秦玲;;肺炎衣原體套式PCR檢測及其臨床意義(摘要)[A];中華醫(yī)學(xué)會第六屆全國結(jié)核病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2000年

5 倪安平;崔京濤;汪曉巍;;4種國產(chǎn)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物體外抗沙眼衣原體和肺炎衣原體作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

6 糜祖煌;秦玲;;肺炎衣原體套式PCR檢測及其臨床意義[A];第五屆全國優(yōu)生科學(xué)大會論文匯編[C];2000年

7 蘇世斌;林勤益;郭浩然;;臺灣成年人肺炎衣原體和新陳代謝癥候群之相關(guān)研究[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2009年

8 楊玲;吳移謀;周洲;鄧仲良;劉R

本文編號：419606