本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌耐藥性分析及其優(yōu)勢(shì)抗原篩選的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 了解天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院銅綠假單胞菌分離株的標(biāo)本來(lái)源和臨床科室分布情況,分析銅綠假單胞菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥特征,比較不同來(lái)源分離菌株的耐藥性差異,為臨床合理選擇抗菌藥物提供依據(jù)。利用噬菌體展示十二肽庫(kù)篩選能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的銅綠假單胞菌優(yōu)勢(shì)抗原表位,分析銅綠假單胞菌抗原的細(xì)胞定位,對(duì)銅綠假單胞菌抗原功能分類情況進(jìn)行分析,為研究銅綠假單胞菌疫苗研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)一步得到具有潛在價(jià)值的疫苗。 方法： 收集2012年8月至2013年8月天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院住院及門診患者送檢標(biāo)本中共分離出的銅綠假單胞菌346株,分析菌株的標(biāo)本來(lái)源和臨床科室分布情況,采用微量肉湯稀釋法對(duì)所有菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn),分析銅綠假單胞菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥情況,將菌株按分離地點(diǎn)住院部A座和B座分為I組和II組；按是否分離自ICU病房分為ICU組和非ICU組,分別比較各組對(duì)多種不同抗菌藥物的耐藥率；收集2012年3月至2012年12月天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院和天津市第四醫(yī)院感染銅綠假單胞菌7-10天的患者血清28份,收集天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院入院體檢者中健康成人血清30份,應(yīng)用噬菌體展示十二肽庫(kù)進(jìn)行1輪陰性選擇淘選和3輪生物淘選,通過(guò)ELISA方法選擇陽(yáng)性克隆噬菌體,對(duì)陽(yáng)性單克隆噬菌體進(jìn)行測(cè)序,與PAO1基因組序列比對(duì),分析銅綠假單胞菌抗原的細(xì)胞定位和功能分類情況。 結(jié)果： 1.346株銅綠假單胞菌半數(shù)以上分離自痰液標(biāo)本,其次為尿液和分泌物,分別占19.7%和6.6%,血液和其它標(biāo)本所占比例較小,分別為2.0%和6.6%。346株銅綠假單胞菌主要分布在中西醫(yī)科(35株,占10.1%)、泌尿外科(34株,占9.8%)、老干部科(32株,占9.2%)、ICU(31株,占9.0%)、兒科(31株,占9.0%)、感染科(30株,占8.7%)和呼吸科(29株,占8.4%),其它科室如外科、神經(jīng)外科、心臟內(nèi)科、腎內(nèi)科、心臟外科、新生兒科、神經(jīng)內(nèi)科等(比例在3%-5%)較少,散在分布。 2.銅綠假單胞菌對(duì)哌拉西林的耐藥率最高,接近30%,其次為頭孢哌酮、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、替卡西林/克拉維酸、慶大霉素和哌拉西林/他唑巴坦,耐藥率在15%～25%之間,其他藥物的耐藥率均在15%以下。 3.自住院部A座分離的銅綠假單胞菌對(duì)頭孢吡肟的耐藥率較住院部B座高,自ICU病房分離的銅綠假單胞菌與非ICU病房耐藥率無(wú)差別。 4.經(jīng)過(guò)3輪生物淘選后,產(chǎn)出/投入由2.8×10-7增至5.7×10-5,優(yōu)勢(shì)抗原表位噬菌體得到了明顯富集。經(jīng)ELISA方法選擇得到30個(gè)陽(yáng)性克隆單噬菌體,測(cè)序后得到12種序列。與PAO1基因組序列比對(duì),得到673個(gè)蛋白,細(xì)胞定位分別為胞漿、內(nèi)膜、漿周、外膜、胞外和未知,所占比例分別為49.3%、21.8%、5.9%、6.1%、1.5%和15.3%。所得蛋白按功能分為26類,各部位的蛋白與細(xì)胞功能一致。出現(xiàn)頻率較高的基因?yàn)椋簆vdD、PA0758、phzFl。胞外和外膜蛋白為銅綠假單胞菌優(yōu)勢(shì)抗原。 結(jié)論： 本院銅綠假單胞菌主要分離自痰液標(biāo)本,其次為尿液。臨床分布科室主要是中西醫(yī)科和泌尿外科。銅綠假單胞菌對(duì)哌拉西林耐藥率最高。自住院部A座分離PA對(duì)頭孢吡肟的耐藥率較住院部B座高,自ICU病房分離的PA與非ICU病房耐藥率無(wú)差別。胞外和外膜蛋白為銅綠假單胞菌優(yōu)勢(shì)抗原,外膜孔蛋白OprE,脂蛋白YfiB,胞外多糖Pel及“分泌因子”類中的假單胞菌素可考慮用于今后疫苗研究。
【關(guān)鍵詞】：假單胞菌 銅綠 耐藥 抗原 基因 疫苗 噬菌體展示十二肽庫(kù)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378.991
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、銅綠假單胞菌臨床分布及藥敏分析15-25
• 1.1 材料與方法15-17
• 1.1.1 材料15-16
• 1.1.2 方法16-17
• 1.2 結(jié)果17-22
• 1.2.1 臨床分布17-18
• 1.2.2 藥敏結(jié)果18-22
• 1.3 討論22-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 二、銅綠假單胞菌優(yōu)勢(shì)抗原篩選的研究25-40
• 2.1 材料和方法25-30
• 2.1.1 材料25-27
• 2.1.2 方法27-30
• 2.2 結(jié)果30-37
• 2.2.1 噬菌體展示隨機(jī)12肽庫(kù)親和篩選30-31
• 2.2.2 陽(yáng)性克隆噬菌體DNA序列分析31
• 2.2.3 陽(yáng)性克隆噬菌體插入序列與PAO1基因組比對(duì)31-34
• 2.2.4 細(xì)胞定位和功能分類34-37
• 2.3 討論37-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明46-47
• 綜述47-57
• 綜述參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌耐藥性分析及其優(yōu)勢(shì)抗原篩選的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：417642