本文關(guān)鍵詞：流式細胞儀用單抗類體外診斷試劑性能評估方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實驗目的：根據(jù)《流式細胞儀配套用檢測試劑注冊申報資料技術(shù)審評指導原則》和《YY/T1184-2010醫(yī)藥行業(yè)標準流式細胞儀用單克隆抗體試劑》的要求,評價流式細胞儀用體外診斷試劑的線性范圍、精密度、準確度以及特異性的性能評估方法的可行性及優(yōu)缺點,通過試驗完善性能評估方法,進而建立適用流式細胞儀用單抗類體外診斷試劑的性能評估方法。 實驗方法：1.線性范圍方法的評估：(1)通過流式細胞術(shù)篩選針對單抗CD19和CD33的陽性和陰性質(zhì)控細胞系；(2)選擇9個濃度水平,每個濃度水平4份復制液,通過分析相應濃度的陽性細胞百分率來評估稀釋細胞濃度線性范圍；(3)選擇經(jīng)篩選確認的陽性細胞株和陰性細胞株按照恒定的細胞總數(shù)將兩種紹胞進行不同比率的混合,陽性細胞數(shù)與陰性細胞數(shù)比例從0%到100%不等,確認合理的陽性細胞百分率的線性范圍。2.準確度評價方法的評估：(1)用已知靶值的細胞,使用試劑進行標記,重復檢測三次,觀察檢測值與靶值是否相符,得到試劑的準確度；(2)進行方法學比對,使用待測試劑和對照試劑同時檢測40個未知樣本,對兩種試劑的檢測結(jié)果做配對樣本T檢驗和相關(guān)系數(shù)分析,從而得到待檢試劑的準確度。3.精密度檢測方法的評估：(1)使用骨髓樣本,連續(xù)檢測20個工作日,每天由兩人完成2次完整運行,每次運行間隔不少于3小時,結(jié)果統(tǒng)計批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度；(2)使用商品化質(zhì)控血,連續(xù)檢測20個工作日,每天由兩人完成2次完整運行,每次運行間隔不少于3小時,結(jié)果統(tǒng)計批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度；(3)使用骨髓樣本,連續(xù)檢測8個工作日,每天兩人共成4次完整運行,每次間隔不少于3小時,結(jié)果統(tǒng)計批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度。4.特異性檢測(1)溶血,將骨髓人為制造不同程度溶血,并對同一來源的未溶血和溶血后的標本進行標記檢測,對檢測結(jié)果進行偏差分析,判斷溶血對試劑是否存在干擾；(2)藥物,按照地塞米松和柔紅霉素使用的方法,對藥品進行稀釋,添加到未用藥病人的骨髓中,使用待測試劑對未添加藥物和已添加藥物的標本進行檢測,檢測結(jié)果進行偏差分析,評價地塞米松和柔紅霉素對試劑是否存在交叉反應；(3)高蛋白,將患有多發(fā)性骨髓瘤的病人骨髓,用PBS進行置換,用置換后的樣本和未置換的同一人骨髓樣本用待測試劑檢測,檢測結(jié)果用偏差分析,判斷高蛋白是否對試劑有影響。 實驗結(jié)果： 1.(1)篩選REH和HSB2為CD19-APC的質(zhì)控細胞,HL60和CEM為CD33-PE的質(zhì)控細胞；(2)通過混合細胞9個濃度的測定,CD19-AI)C每人次的稀釋細胞濃度線性范圍為6-0.25×106,CD33-PE每人次的稀釋細胞濃度線性范圍為6～0.5×106；(3)陽性細胞數(shù)與陰性細胞數(shù)比例從0%到100%不等,確認CD19-APC和CD33-PE百分率的線性范圍均為0%到100%。 2.(1) CD19-APC檢測商品化質(zhì)控血的結(jié)果在靶值范圍內(nèi),CD33-PE檢測商品化質(zhì)控血的結(jié)果超出靶值范圍；(2)進行方法學比對,CD19-APC和CD33-PE與對照試劑檢測結(jié)果進行T檢驗的P值均大于0.05,相關(guān)系數(shù)均大于0.95。 3.(1)20天內(nèi)使用骨髓標本檢驗總精密度時,批內(nèi)精密度結(jié)果陽性百分率與熒光均小于10%,批間精密度中陽性百分率的偏差小于10%,而熒光值的偏差大于10%；(2)使用質(zhì)控血檢測,則批內(nèi)及批間精密度各項均小于10%；(3)使用骨髓標本進行擴大每天自由度的嘗試,進行8天檢測,批內(nèi)精密度結(jié)果均小于10%,而批間精密度中,陽性百分率的偏差大于10%,熒光值偏差小于10%。 4.(1)溶血,發(fā)生溶血時,檢測結(jié)果偏差大于10%,對此類型的試劑有影響,并且隨著溶血程度的加深,對試劑影響變大；(2)藥物,加入地塞米松時,檢測偏差小于10%,地塞米松對試劑檢測無影響,而加入柔紅霉素時,檢測偏差大于10%,柔紅霉素對試劑有影響；(3)高蛋白,置換血漿前后,檢測結(jié)果偏差小于10%,高蛋白對此類試劑使用無明顯影響。 實驗結(jié)論： 1.篩選合適的細胞系可以做為質(zhì)控細胞系,評估單抗類試劑各項指標。利用質(zhì)控細胞可以評估出單抗類體外試劑的線性,為了真實反映試劑的性能,應給出試劑的稀釋細胞濃度線性范圍陽性細胞百分率的線性范圍。 2.商品化的帶有靶值的質(zhì)控血,只能質(zhì)控少部分試劑,并且受到生產(chǎn)廠家、運輸儲存條件以及質(zhì)控血內(nèi)的細胞穩(wěn)定性的局限,方法學比對的應用范圍更廣。 3.骨髓標本無法滿足長時間的檢測需要,質(zhì)控血使用范圍小,需要尋找更好的方法來對試劑的精密度進行評估。 4.人為模擬的對標本的破壞以及進行藥物或者其他組分的添加,可以對試劑的特異性進行評估,所選取的類型應足夠廣泛,才能更真實的反應試劑的特異性。
【關(guān)鍵詞】：流式細胞儀 體外診斷試劑 性能評估
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 材料與試劑14-16
• 1、主要實驗儀器14
• 2、主要試劑14
• 3、細胞系14-15
• 4、主要溶液配制15
• 5、商品化質(zhì)控物15
• 6、藥物15
• 7、耗材15-16
• 第一部分 試劑的線性研究16-36
• 一、實驗方法16-21
• 二、實驗結(jié)果21-33
• 三、討論33-35
• 四、結(jié)論35-36
• 第二部分 準確度測定36-48
• 一、實驗方法36-37
• 二、實驗結(jié)果37-44
• 三、討論44-47
• 四、結(jié)論47-48
• 第三部分 總精密度測定48-73
• 一、實驗方法48-49
• 二、試驗結(jié)果49-71
• 三、討論71-72
• 四、結(jié)論72-73
• 第四部分 特異性實驗73-80
• 一、實驗方法73-76
• 二、實驗結(jié)果76-78
• 三、討論78-79
• 四、結(jié)論79-80
• 參考文獻80-82
• 綜述82-90
• 參考文獻87-90
• 致謝90-91

【參考文獻】

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本文編號：412788