本文關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞儀用單抗類體外診斷試劑性能評(píng)估方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模焊鶕?jù)《流式細(xì)胞儀配套用檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料技術(shù)審評(píng)指導(dǎo)原則》和《YY/T1184-2010醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀用單克隆抗體試劑》的要求,評(píng)價(jià)流式細(xì)胞儀用體外診斷試劑的線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度以及特異性的性能評(píng)估方法的可行性及優(yōu)缺點(diǎn),通過(guò)試驗(yàn)完善性能評(píng)估方法,進(jìn)而建立適用流式細(xì)胞儀用單抗類體外診斷試劑的性能評(píng)估方法。 實(shí)驗(yàn)方法：1.線性范圍方法的評(píng)估：(1)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)篩選針對(duì)單抗CD19和CD33的陽(yáng)性和陰性質(zhì)控細(xì)胞系；(2)選擇9個(gè)濃度水平,每個(gè)濃度水平4份復(fù)制液,通過(guò)分析相應(yīng)濃度的陽(yáng)性細(xì)胞百分率來(lái)評(píng)估稀釋細(xì)胞濃度線性范圍；(3)選擇經(jīng)篩選確認(rèn)的陽(yáng)性細(xì)胞株和陰性細(xì)胞株按照恒定的細(xì)胞總數(shù)將兩種紹胞進(jìn)行不同比率的混合,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與陰性細(xì)胞數(shù)比例從0%到100%不等,確認(rèn)合理的陽(yáng)性細(xì)胞百分率的線性范圍。2.準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法的評(píng)估：(1)用已知靶值的細(xì)胞,使用試劑進(jìn)行標(biāo)記,重復(fù)檢測(cè)三次,觀察檢測(cè)值與靶值是否相符,得到試劑的準(zhǔn)確度；(2)進(jìn)行方法學(xué)比對(duì),使用待測(cè)試劑和對(duì)照試劑同時(shí)檢測(cè)40個(gè)未知樣本,對(duì)兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果做配對(duì)樣本T檢驗(yàn)和相關(guān)系數(shù)分析,從而得到待檢試劑的準(zhǔn)確度。3.精密度檢測(cè)方法的評(píng)估：(1)使用骨髓樣本,連續(xù)檢測(cè)20個(gè)工作日,每天由兩人完成2次完整運(yùn)行,每次運(yùn)行間隔不少于3小時(shí),結(jié)果統(tǒng)計(jì)批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度；(2)使用商品化質(zhì)控血,連續(xù)檢測(cè)20個(gè)工作日,每天由兩人完成2次完整運(yùn)行,每次運(yùn)行間隔不少于3小時(shí),結(jié)果統(tǒng)計(jì)批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度；(3)使用骨髓樣本,連續(xù)檢測(cè)8個(gè)工作日,每天兩人共成4次完整運(yùn)行,每次間隔不少于3小時(shí),結(jié)果統(tǒng)計(jì)批內(nèi)精密度和批間精密度,從而獲得試劑總精密度。4.特異性檢測(cè)(1)溶血,將骨髓人為制造不同程度溶血,并對(duì)同一來(lái)源的未溶血和溶血后的標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記檢測(cè),對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行偏差分析,判斷溶血對(duì)試劑是否存在干擾；(2)藥物,按照地塞米松和柔紅霉素使用的方法,對(duì)藥品進(jìn)行稀釋,添加到未用藥病人的骨髓中,使用待測(cè)試劑對(duì)未添加藥物和已添加藥物的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行偏差分析,評(píng)價(jià)地塞米松和柔紅霉素對(duì)試劑是否存在交叉反應(yīng)；(3)高蛋白,將患有多發(fā)性骨髓瘤的病人骨髓,用PBS進(jìn)行置換,用置換后的樣本和未置換的同一人骨髓樣本用待測(cè)試劑檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果用偏差分析,判斷高蛋白是否對(duì)試劑有影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.(1)篩選REH和HSB2為CD19-APC的質(zhì)控細(xì)胞,HL60和CEM為CD33-PE的質(zhì)控細(xì)胞；(2)通過(guò)混合細(xì)胞9個(gè)濃度的測(cè)定,CD19-AI)C每人次的稀釋細(xì)胞濃度線性范圍為6-0.25×106,CD33-PE每人次的稀釋細(xì)胞濃度線性范圍為6～0.5×106；(3)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與陰性細(xì)胞數(shù)比例從0%到100%不等,確認(rèn)CD19-APC和CD33-PE百分率的線性范圍均為0%到100%。 2.(1) CD19-APC檢測(cè)商品化質(zhì)控血的結(jié)果在靶值范圍內(nèi),CD33-PE檢測(cè)商品化質(zhì)控血的結(jié)果超出靶值范圍；(2)進(jìn)行方法學(xué)比對(duì),CD19-APC和CD33-PE與對(duì)照試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行T檢驗(yàn)的P值均大于0.05,相關(guān)系數(shù)均大于0.95。 3.(1)20天內(nèi)使用骨髓標(biāo)本檢驗(yàn)總精密度時(shí),批內(nèi)精密度結(jié)果陽(yáng)性百分率與熒光均小于10%,批間精密度中陽(yáng)性百分率的偏差小于10%,而熒光值的偏差大于10%；(2)使用質(zhì)控血檢測(cè),則批內(nèi)及批間精密度各項(xiàng)均小于10%；(3)使用骨髓標(biāo)本進(jìn)行擴(kuò)大每天自由度的嘗試,進(jìn)行8天檢測(cè),批內(nèi)精密度結(jié)果均小于10%,而批間精密度中,陽(yáng)性百分率的偏差大于10%,熒光值偏差小于10%。 4.(1)溶血,發(fā)生溶血時(shí),檢測(cè)結(jié)果偏差大于10%,對(duì)此類型的試劑有影響,并且隨著溶血程度的加深,對(duì)試劑影響變大；(2)藥物,加入地塞米松時(shí),檢測(cè)偏差小于10%,地塞米松對(duì)試劑檢測(cè)無(wú)影響,而加入柔紅霉素時(shí),檢測(cè)偏差大于10%,柔紅霉素對(duì)試劑有影響；(3)高蛋白,置換血漿前后,檢測(cè)結(jié)果偏差小于10%,高蛋白對(duì)此類試劑使用無(wú)明顯影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 1.篩選合適的細(xì)胞系可以做為質(zhì)控細(xì)胞系,評(píng)估單抗類試劑各項(xiàng)指標(biāo)。利用質(zhì)控細(xì)胞可以評(píng)估出單抗類體外試劑的線性,為了真實(shí)反映試劑的性能,應(yīng)給出試劑的稀釋細(xì)胞濃度線性范圍陽(yáng)性細(xì)胞百分率的線性范圍。 2.商品化的帶有靶值的質(zhì)控血,只能質(zhì)控少部分試劑,并且受到生產(chǎn)廠家、運(yùn)輸儲(chǔ)存條件以及質(zhì)控血內(nèi)的細(xì)胞穩(wěn)定性的局限,方法學(xué)比對(duì)的應(yīng)用范圍更廣。 3.骨髓標(biāo)本無(wú)法滿足長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)需要,質(zhì)控血使用范圍小,需要尋找更好的方法來(lái)對(duì)試劑的精密度進(jìn)行評(píng)估。 4.人為模擬的對(duì)標(biāo)本的破壞以及進(jìn)行藥物或者其他組分的添加,可以對(duì)試劑的特異性進(jìn)行評(píng)估,所選取的類型應(yīng)足夠廣泛,才能更真實(shí)的反應(yīng)試劑的特異性。
【關(guān)鍵詞】：流式細(xì)胞儀 體外診斷試劑 性能評(píng)估
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 材料與試劑14-16
• 1、主要實(shí)驗(yàn)儀器14
• 2、主要試劑14
• 3、細(xì)胞系14-15
• 4、主要溶液配制15
• 5、商品化質(zhì)控物15
• 6、藥物15
• 7、耗材15-16
• 第一部分 試劑的線性研究16-36
• 一、實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-33
• 三、討論33-35
• 四、結(jié)論35-36
• 第二部分 準(zhǔn)確度測(cè)定36-48
• 一、實(shí)驗(yàn)方法36-37
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-44
• 三、討論44-47
• 四、結(jié)論47-48
• 第三部分 總精密度測(cè)定48-73
• 一、實(shí)驗(yàn)方法48-49
• 二、試驗(yàn)結(jié)果49-71
• 三、討論71-72
• 四、結(jié)論72-73
• 第四部分 特異性實(shí)驗(yàn)73-80
• 一、實(shí)驗(yàn)方法73-76
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果76-78
• 三、討論78-79
• 四、結(jié)論79-80
• 參考文獻(xiàn)80-82
• 綜述82-90
• 參考文獻(xiàn)87-90
• 致謝90-91

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞儀用單抗類體外診斷試劑性能評(píng)估方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：412788