本文關(guān)鍵詞：水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)及其免疫反應(yīng)性的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的真核細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)的胞外域基因,應(yīng)用g E抗原建立VZV感染的血清學(xué)試驗(yàn)來評(píng)價(jià)VZV疫苗的免疫效果。方法構(gòu)建含有VZV g E胞外域基因的真核表達(dá)質(zhì)粒p CDNA3.1-g E,測(cè)序后脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)VZV g E的細(xì)胞株。采用RT-PCR法檢測(cè)VZV g E的mRNA,Western blot和間接免疫熒光法檢測(cè)g E的免疫反應(yīng)性,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni2+-NTA柱純化后包被ELISA板,對(duì)127份0~10歲正常兒童血清中VZV-Ig G抗體水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果成功篩選出能夠穩(wěn)定表達(dá)VZV g E胞外域基因的COS-7細(xì)胞株,RT-PCR檢測(cè)到g E的mRNA,經(jīng)Western blot和間接免疫熒光鑒定,g E具有明顯的免疫反應(yīng)性,COS-7細(xì)胞株和其培養(yǎng)上清液中均有g(shù) E融合蛋白,表達(dá)量約為0.632 mg/ml,純度約為90%。ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了127份0~10歲兒童血清中VZV-Ig G抗體,總陽性率為81.89%,特異度和靈敏度分別為93.75%和88.24%。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)獲得穩(wěn)定高效表達(dá)VZV g E胞外域基因的COS-7細(xì)胞株,建立的ELISA血清學(xué)檢測(cè)方法有助于VZV感染的流行病學(xué)研究和對(duì)易感人群VZV感染的診斷和預(yù)防。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室;哥倫比亞大學(xué)病理與細(xì)胞生物系;
【關(guān)鍵詞】： 水痘-帶狀皰疹病毒 糖蛋白E 轉(zhuǎn)染 真核穩(wěn)定表達(dá) 血清學(xué)試驗(yàn)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號(hào):30872253) 安徽省科技廳科技攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào):08010302179) 校企合作實(shí)踐教育基地(編號(hào):2012sjjd014)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 2014-11-25接收水痘-帶狀皰疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)屬皰疹病毒α亞科,為雙鏈DNA病毒,原發(fā)感染引起水痘,患兒的全身癥狀和皮疹消退以后有少量殘存的病毒會(huì)終身潛伏于宿主的脊髓后根神經(jīng)節(jié)、顱神經(jīng)節(jié)和腸道神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)細(xì)胞中[1-2]。日后當(dāng)機(jī)體免疫力降低時(shí),潛伏在

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本文編號(hào)：412320