本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲(chóng)疫苗候選分子PvMSP1對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化成熟和功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)觀察間日瘧原蟲(chóng)疫苗候選分子PvMSP1(Plasmodium vivax merozoite surface protein1)對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)分化成熟和功能的影響；(2)探討PvMSP1通過(guò)TLR (Toll Like Receptors)通路活化DC的作用。 方法:(1)將重組表達(dá)質(zhì)粒PET28a-PvMSP1轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3+)中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)PvMSP1重組蛋白,Ni柱親和層析純化重組蛋白,快速液相蛋白層析分離系統(tǒng)(FPLC)進(jìn)一步純化并檢測(cè)其純度,SDS-PAGE電泳驗(yàn)證目的蛋白；(2)用健康成人外周血分離單核細(xì)胞,在細(xì)胞因子IL-4、GM-CSF的作用下獲得未成熟DC (immature DC, imDC);(3)用不同劑量的PvMSP1(1.0μg/ml、10.0μg/ml、100.0μg/ml)分別誘導(dǎo)imDC繼續(xù)分化；(4)流式細(xì)胞術(shù)分析不同處理的DC表面成熟性相關(guān)分子CD83、CD86、HLA-DR的變化；(5)ELISA檢測(cè)DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的表達(dá)水平；(6)RT-PCR檢測(cè)DC TLR4、TLR9mRNA的表達(dá)水平；(7)MTT法檢測(cè)DC誘導(dǎo)白體淋巴細(xì)胞增殖的能力。 結(jié)果:(1)獲得了PvMSP1重組蛋白,其蛋白純度達(dá)94%；(2)外周血單核細(xì)胞能在IL-4、GM-CSF的誘導(dǎo)下分化為imDC,細(xì)胞具有典型的DC特征性形態(tài)；LPS能夠誘導(dǎo)DC成熟,其表面成熟性分子CD83、CD86、HLA-DR的表達(dá)均增加;(3)PvMSP1對(duì)DC表型的影響：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組CD83、CD86、HLA-DR的表達(dá)均明顯增高(P0.01,P0.05,P0.05),但其不同劑量組各表型的表達(dá)均無(wú)明顯變化(p0.05)；(4)DC細(xì)胞因子IL-10、IL-12的表達(dá)水平：與未刺激組比較,LPS誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達(dá)量均明顯增加(p0.01),PvMSP1誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達(dá)量也均明顯增加(P0.05,P0.01),但其不同劑量組IL-10、IL-12的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(p0.05)；(5)DC TLR4、TLR9mRNA的表達(dá)水平：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組DC TLR4mRNA的表達(dá)均明顯增加(p0.01),TLR9mRNA的表達(dá)均無(wú)明顯變化(p0.05),但其不同劑量組TLR4、TLR9mRNA的表達(dá)也均無(wú)明顯變化；與PvMSP1各劑量組比較,LPS誘導(dǎo)組TLR4mRNA的表達(dá)增加(p0.05),TLR9mRNA的表達(dá)無(wú)明顯變化；(6)DC對(duì)白體淋巴細(xì)胞增殖作用：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組MTT數(shù)值均明顯增加(P0.01),但其不同劑量組MTT數(shù)值均無(wú)明顯變化(p0.05)。 結(jié)論：(1)PvMSP1具有促進(jìn)DC分化成熟的作用,且經(jīng)其誘導(dǎo)成熟的DC具備抗原遞呈功能；(2)PvMSP1可經(jīng)TLR4通路而非TLR9通路誘導(dǎo)DC成熟。
【關(guān)鍵詞】：間日瘧原蟲(chóng) PvMSP1 樹(shù)突狀細(xì)胞 分化 成熟 TLR
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R382.31;R392
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備13-14
• 3 實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 4 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理23-24
• 結(jié)果24-35
• 1 Ni柱親和層析純化的PvMSP1SDS-PAGE電泳分析24
• 2 PvMSP1純化樣本FPLC純度檢測(cè)結(jié)果24-25
• 3 DC的培養(yǎng)結(jié)果25-28
• 4 ELISA檢測(cè)DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的表達(dá)水平28-31
• 5 DCTLR4、TLR9mRNA的表達(dá)31-34
• 6 DC誘導(dǎo)自體淋巴細(xì)胞增殖的能力34-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 致謝46-47
• 附錄47-61
• 附錄 A 中英文術(shù)語(yǔ)縮略語(yǔ)對(duì)照表87-49
• 附錄 B 常用試劑配制49-51
• 附錄 C 個(gè)人簡(jiǎn)歷51
• 附錄 D 已發(fā)表的論文51-52
• 附錄 E 綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)58-61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 邵丁丁;CD4~+T細(xì)胞在抗紅內(nèi)期瘧原蟲(chóng)免疫中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2005年04期

2 買(mǎi)月琴;陶志勇;劉丹;陳勇;方強(qiáng);李柏青;夏惠;;間日瘧現(xiàn)癥患者外周血樹(shù)突狀細(xì)胞亞群的變化[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年10期

3 陳新年;孔評(píng)石;夏惠;;間日瘧原蟲(chóng)可溶性抗原對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞成熟的影響[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年12期

4 陳姝,陸惠民,高琪,張山鷹,唐學(xué)恒,孫臻安;IL-12對(duì)伯氏瘧原蟲(chóng)紅內(nèi)期感染小鼠Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2004年05期

5 孔評(píng)石;夏惠;Kulachart Jangpatarapongsa;李柏青;李光友;;間日瘧原蟲(chóng)瘧色素對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞成熟的影響[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2010年03期

6 高琪;;我國(guó)消除瘧疾面臨的機(jī)遇與挑戰(zhàn)[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2011年04期

7 李光友;夏惠;陶志勇;陳勇;方強(qiáng);;PvMSP1-19重組蛋白體外對(duì)間日瘧患者外周血T細(xì)胞免疫功能的影響[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲(chóng)疫苗候選分子PvMSP1對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化成熟和功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：409632