本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲疫苗候選分子PvMSP1對樹突狀細胞分化成熟和功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)觀察間日瘧原蟲疫苗候選分子PvMSP1(Plasmodium vivax merozoite surface protein1)對樹突狀細胞(dendritic cell, DC)分化成熟和功能的影響；(2)探討PvMSP1通過TLR (Toll Like Receptors)通路活化DC的作用。 方法:(1)將重組表達質(zhì)粒PET28a-PvMSP1轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3+)中,IPTG誘導(dǎo)表達PvMSP1重組蛋白,Ni柱親和層析純化重組蛋白,快速液相蛋白層析分離系統(tǒng)(FPLC)進一步純化并檢測其純度,SDS-PAGE電泳驗證目的蛋白；(2)用健康成人外周血分離單核細胞,在細胞因子IL-4、GM-CSF的作用下獲得未成熟DC (immature DC, imDC);(3)用不同劑量的PvMSP1(1.0μg/ml、10.0μg/ml、100.0μg/ml)分別誘導(dǎo)imDC繼續(xù)分化；(4)流式細胞術(shù)分析不同處理的DC表面成熟性相關(guān)分子CD83、CD86、HLA-DR的變化；(5)ELISA檢測DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的表達水平；(6)RT-PCR檢測DC TLR4、TLR9mRNA的表達水平；(7)MTT法檢測DC誘導(dǎo)白體淋巴細胞增殖的能力。 結(jié)果:(1)獲得了PvMSP1重組蛋白,其蛋白純度達94%；(2)外周血單核細胞能在IL-4、GM-CSF的誘導(dǎo)下分化為imDC,細胞具有典型的DC特征性形態(tài)；LPS能夠誘導(dǎo)DC成熟,其表面成熟性分子CD83、CD86、HLA-DR的表達均增加;(3)PvMSP1對DC表型的影響：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組CD83、CD86、HLA-DR的表達均明顯增高(P0.01,P0.05,P0.05),但其不同劑量組各表型的表達均無明顯變化(p0.05)；(4)DC細胞因子IL-10、IL-12的表達水平：與未刺激組比較,LPS誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達量均明顯增加(p0.01),PvMSP1誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達量也均明顯增加(P0.05,P0.01),但其不同劑量組IL-10、IL-12的表達量均無明顯變化(p0.05)；(5)DC TLR4、TLR9mRNA的表達水平：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組DC TLR4mRNA的表達均明顯增加(p0.01),TLR9mRNA的表達均無明顯變化(p0.05),但其不同劑量組TLR4、TLR9mRNA的表達也均無明顯變化；與PvMSP1各劑量組比較,LPS誘導(dǎo)組TLR4mRNA的表達增加(p0.05),TLR9mRNA的表達無明顯變化；(6)DC對白體淋巴細胞增殖作用：與未刺激組比較,PvMSP1誘導(dǎo)組MTT數(shù)值均明顯增加(P0.01),但其不同劑量組MTT數(shù)值均無明顯變化(p0.05)。 結(jié)論：(1)PvMSP1具有促進DC分化成熟的作用,且經(jīng)其誘導(dǎo)成熟的DC具備抗原遞呈功能；(2)PvMSP1可經(jīng)TLR4通路而非TLR9通路誘導(dǎo)DC成熟。
【關(guān)鍵詞】：間日瘧原蟲 PvMSP1 樹突狀細胞 分化 成熟 TLR
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R382.31;R392
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-24
• 1 實驗材料13
• 2 實驗設(shè)備13-14
• 3 實驗試劑14-15
• 4 實驗方法15-23
• 5 統(tǒng)計學(xué)處理23-24
• 結(jié)果24-35
• 1 Ni柱親和層析純化的PvMSP1SDS-PAGE電泳分析24
• 2 PvMSP1純化樣本FPLC純度檢測結(jié)果24-25
• 3 DC的培養(yǎng)結(jié)果25-28
• 4 ELISA檢測DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的表達水平28-31
• 5 DCTLR4、TLR9mRNA的表達31-34
• 6 DC誘導(dǎo)自體淋巴細胞增殖的能力34-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-46
• 致謝46-47
• 附錄47-61
• 附錄 A 中英文術(shù)語縮略語對照表87-49
• 附錄 B 常用試劑配制49-51
• 附錄 C 個人簡歷51
• 附錄 D 已發(fā)表的論文51-52
• 附錄 E 綜述52-61
• 參考文獻58-61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：間日瘧原蟲疫苗候選分子PvMSP1對樹突狀細胞分化成熟和功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：409632