研究目的： CD147是一種屬于免疫球蛋白超家族的跨膜糖蛋白,本實驗組前期研究表明CD147能促進惡性黑素瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、增殖和血管新生,但具體機制還不十分清楚。鈣離子信號調(diào)節(jié)親環(huán)素配體(calcium-modulating cyclophilin ligand, CAML)是定位于線粒體的跨膜蛋白,能調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子濃度,本研究擬通過對CD147與CAML在惡性黑素瘤細胞株A375中相互作用的研究,明確其相互作用的位點,在細胞中的定位及對胞內(nèi)鈣離子的影響,為進一步揭示惡性黑素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.以CD147為誘餌,運用酵母雙雜交技術(shù)篩選人胚腦細胞文庫,以尋求與其相互作用的蛋白。 2.構(gòu)建CAML與CD147全長及缺失突變體的真核表達載體。 3.運用免疫共沉淀(co-IP)驗證CD147與CAML相互結(jié)合,同時共轉(zhuǎn)染CAML質(zhì)粒及CD147的不同缺失突變體質(zhì)粒至工具細胞293T, co-IP分析CD147與CAML相互結(jié)合的位點。 4.運用細胞免疫熒光方法觀察A375細胞中CD147與CAML的定位,同時在A375細胞中共轉(zhuǎn)...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
縮略表
前言
1 材料方法
    1.1 材料
        1.1.1 試劑
        1.1.2 主要耗材
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要自制溶液配方
        1.1.5 細胞株
    1.2 方法
        1.2.1 分子克隆
        1.2.2 酵母雙雜交
        1.2.3 細胞培養(yǎng)
        1.2.4 免疫共沉淀及免疫印跡
        1.2.5 細胞免疫熒光
        1.2.6 胞內(nèi)鈣離子檢測
2 結(jié)果
    2.1 體外實驗證實CD147-CAML相結(jié)合
    2.2 CD147通過跨膜段與CAML結(jié)合
    2.3 免疫熒光顯示CD147與CAML共定位
    2.4 CD147與胞漿內(nèi)鈣離子及MMP的關(guān)系
3 討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
獲獎、參與課題及發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：4045668