發(fā)布時間：2017-05-28 21:07

  本文關(guān)鍵詞：人糞中兩種鉤蟲卵的PCR分類鑒定方法初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：試從人類糞便標本中提取鉤蟲卵DNA利用PCR技術(shù)擴增COI基因，對寄生人體的兩種主要鉤蟲，十二指腸鉤口線蟲和美洲板口線蟲進行分類鑒定，為達到快速從人類糞便中對鉤蟲進行分類鑒定與診斷的目的奠定初步的實驗基礎(chǔ)。 方法：實驗分為現(xiàn)場采樣和實驗室檢測兩部分，現(xiàn)場工作主要是收集西雙版納州景洪市和勐海縣多所小學(xué)四年級學(xué)生的糞便樣本，采用改良加藤法對每份糞便樣本進行“一糞三檢”，經(jīng)鏡檢確定寄生蟲蟲卵類型并且對各種蟲卵分別進行計數(shù)，篩選出鉤蟲卵含量較高的樣本，將樣本置于95%的乙醇中于4冰箱保存準備下一步檢測；實驗室中將收集的標本采用PCR方法進行分類鑒定并測序，測序結(jié)果經(jīng)BLAST比對確定基因類型。 結(jié)果：選取鉤蟲卵含量較高的40份糞便樣本作為陽性樣本，其中單純只含有鉤蟲卵的樣本為26份，除鉤蟲卵外還含有蛔蟲卵的樣本為3份，除鉤蟲卵外還含有鞭蟲卵的樣本為5份，同時含有鉤蟲卵、蛔蟲卵、鞭蟲卵的樣本為6份。選取10份不含鉤蟲卵或不含任何蟲卵的糞便樣本作為陰性對照樣本。經(jīng)PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果，14份鏡檢陽性樣本出現(xiàn)陽性條帶，位置在300bp-500bp之間，測序后進行BLAST比對，有6份樣本與美洲鉤蟲COI基因的相似率均在84%-99%，即敏感性35%（14/40），假陽性57%（8/14）；而作為對照的10份陰性樣本PCR擴增后，瓊脂糖凝膠電泳均未見條帶，特異性100%。 結(jié)論：實驗證明了利用PCR技術(shù)擴增從糞便中提取的鉤蟲卵DNA，并且以此鑒定出感染鉤蟲類型的方法是可行的，但由于初步實驗的檢出率較低，可能受多個步驟和多種因素影響，需要后續(xù)研究不斷改進實驗方法，提高實驗的敏感性、特異性等。
【關(guān)鍵詞】：十二指腸鉤口線蟲 美洲板口線蟲 分類鑒定 PCR
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R383.13
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-20
• 材料與方法20-27
• 結(jié)果27-34
• 討論與分析34-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 附錄40-41
• 文獻綜述41-49
• 參考文獻46-49
• 致謝49

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：人糞中兩種鉤蟲卵的PCR分類鑒定方法初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：403455