本文關(guān)鍵詞：人糞中兩種鉤蟲卵的PCR分類鑒定方法初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：試從人類糞便標(biāo)本中提取鉤蟲卵DNA利用PCR技術(shù)擴(kuò)增COI基因，對(duì)寄生人體的兩種主要鉤蟲，十二指腸鉤口線蟲和美洲板口線蟲進(jìn)行分類鑒定，為達(dá)到快速從人類糞便中對(duì)鉤蟲進(jìn)行分類鑒定與診斷的目的奠定初步的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：實(shí)驗(yàn)分為現(xiàn)場(chǎng)采樣和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)兩部分，現(xiàn)場(chǎng)工作主要是收集西雙版納州景洪市和勐�？h多所小學(xué)四年級(jí)學(xué)生的糞便樣本，采用改良加藤法對(duì)每份糞便樣本進(jìn)行“一糞三檢”，經(jīng)鏡檢確定寄生蟲蟲卵類型并且對(duì)各種蟲卵分別進(jìn)行計(jì)數(shù)，篩選出鉤蟲卵含量較高的樣本，將樣本置于95%的乙醇中于4冰箱保存準(zhǔn)備下一步檢測(cè)；實(shí)驗(yàn)室中將收集的標(biāo)本采用PCR方法進(jìn)行分類鑒定并測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST比對(duì)確定基因類型。 結(jié)果：選取鉤蟲卵含量較高的40份糞便樣本作為陽性樣本，其中單純只含有鉤蟲卵的樣本為26份，除鉤蟲卵外還含有蛔蟲卵的樣本為3份，除鉤蟲卵外還含有鞭蟲卵的樣本為5份，同時(shí)含有鉤蟲卵、蛔蟲卵、鞭蟲卵的樣本為6份。選取10份不含鉤蟲卵或不含任何蟲卵的糞便樣本作為陰性對(duì)照樣本。經(jīng)PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果，14份鏡檢陽性樣本出現(xiàn)陽性條帶，位置在300bp-500bp之間，測(cè)序后進(jìn)行BLAST比對(duì)，有6份樣本與美洲鉤蟲COI基因的相似率均在84%-99%，即敏感性35%（14/40），假陽性57%（8/14）；而作為對(duì)照的10份陰性樣本PCR擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳均未見條帶，特異性100%。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)證明了利用PCR技術(shù)擴(kuò)增從糞便中提取的鉤蟲卵DNA，并且以此鑒定出感染鉤蟲類型的方法是可行的，但由于初步實(shí)驗(yàn)的檢出率較低，可能受多個(gè)步驟和多種因素影響，需要后續(xù)研究不斷改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，提高實(shí)驗(yàn)的敏感性、特異性等。
【關(guān)鍵詞】：十二指腸鉤口線蟲 美洲板口線蟲 分類鑒定 PCR
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R383.13
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-20
• 材料與方法20-27
• 結(jié)果27-34
• 討論與分析34-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 附錄40-41
• 文獻(xiàn)綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：403455