造血干/祖細(xì)胞（hematopoietic stem progenitor cells,HSPCs）在治療貧血等血液疾病、白血病等癌癥病人的造血重建、基因治療和免疫治療等方面有極重要的臨床應(yīng)用價值,因此多年來一直得到科研工作者和臨床醫(yī)生的高度重視和關(guān)注。雖然前人對HSPCs的體外擴增已經(jīng)做了大量的實驗研究,但由于培養(yǎng)條件對HSPCs體外擴增的影響非常復(fù)雜,在不同的培養(yǎng)條件下,擴增效果差別很大,眾多的影響參數(shù)均需要深入研究。 造血干/祖細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時的有效作用距離還是一個懸而未決的問題,為此,本文采用修正的transwell改變臍帶血來源的造血干/祖細(xì)胞（HSPCs）和人脂肪組織來源的脂肪干細(xì)胞（adipose derived stem cells,ADSCs）的作用距離,獲得最佳的細(xì)胞共培養(yǎng)距離。采用的方法是在無菌條件下采集正常足月產(chǎn)婦臍帶血,與PBS緩沖液1:1等體積混合,利用Ficoll分離液（1.077g/ml）密度梯度離心（2500rpm,25min）收獲單個核細(xì)胞（mononuclear cells,MNCs）。共培養(yǎng)時先將ADSCs以2×10～5cells/ml...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1單核細(xì)胞生長狀態(tài)(0h，明場，放大100倍)

隔3d換液一次，細(xì)胞鋪滿瓶底，傳代。2.2實驗結(jié)果與討論密度梯度離心法得到的單個核細(xì)胞如圖2.1所示。由圖可見，單核細(xì)胞大多呈圓形，細(xì)胞懸浮生長。由圖2.2可見，第n代ADSCs培養(yǎng)24h后有稀疏分布的單個細(xì)胞開始貼壁生長，呈多角形或長梭形散布于瓶底。培養(yǎng)至72h時，貼壁細(xì)胞逐漸....

圖2.2第11代ADSCs生長狀態(tài)(A一ld，B--Zd，c--3d，卜4d，E--sd，P--6d，明場，放大100倍)

2.2實驗結(jié)果與討論密度梯度離心法得到的單個核細(xì)胞如圖2.1所示。由圖可見，單核細(xì)胞大多呈圓形，細(xì)胞懸浮生長。由圖2.2可見，第n代ADSCs培養(yǎng)24h后有稀疏分布的單個細(xì)胞開始貼壁生長，呈多角形或長梭形散布于瓶底。培養(yǎng)至72h時，貼壁細(xì)胞逐漸增多，貼壁細(xì)胞形成集落，呈漩渦狀、輻....

圖3.4細(xì)胞不同間距CFU一GM擴增倍數(shù)F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneells

圖3.4細(xì)胞不同間距CFU一GM擴增倍數(shù)F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneellsCFU一GM集落的擴增倍數(shù)與細(xì)胞間距的關(guān)系如圖3.4示�？梢姡�(xì)胞共培養(yǎng)間距為350協(xié)m時，相應(yīng)的單個核....

圖3.7不同培養(yǎng)方式下擴增的脂肪干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)14、21天后Toluldineblue染色(A，B:陰性對照;C，D:2Week;E，F(xiàn):3week;C，E:恤well間接接觸共培養(yǎng);D，F(xiàn):直接接觸共培養(yǎng))

說明由所擴增的細(xì)胞分化成的成骨細(xì)胞具有較好的成骨能力。將不同培養(yǎng)方式擴增的細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，分別于第7、14、21天行Toluidineblue染色，以第14、21天染色結(jié)果為例，如圖3.7所示�！�.’.峨{毅’布勺份、一、‘打一‘·’‘氣一l，‘·咨一，."二.;二‘一八....

本文編號：4022699