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臍帶血造血干/祖細(xì)胞與脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng)時作用距離的研究

發(fā)布時間:2025-01-04 01:33
  造血干/祖細(xì)胞(hematopoietic stem progenitor cells,HSPCs)在治療貧血等血液疾病、白血病等癌癥病人的造血重建、基因治療和免疫治療等方面有極重要的臨床應(yīng)用價值,因此多年來一直得到科研工作者和臨床醫(yī)生的高度重視和關(guān)注。雖然前人對HSPCs的體外擴增已經(jīng)做了大量的實驗研究,但由于培養(yǎng)條件對HSPCs體外擴增的影響非常復(fù)雜,在不同的培養(yǎng)條件下,擴增效果差別很大,眾多的影響參數(shù)均需要深入研究。 造血干/祖細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時的有效作用距離還是一個懸而未決的問題,為此,本文采用修正的transwell改變臍帶血來源的造血干/祖細(xì)胞(HSPCs)和人脂肪組織來源的脂肪干細(xì)胞(adipose derived stem cells,ADSCs)的作用距離,獲得最佳的細(xì)胞共培養(yǎng)距離。采用的方法是在無菌條件下采集正常足月產(chǎn)婦臍帶血,與PBS緩沖液1:1等體積混合,利用Ficoll分離液(1.077g/ml)密度梯度離心(2500rpm,25min)收獲單個核細(xì)胞(mononuclear cells,MNCs)。共培養(yǎng)時先將ADSCs以2×10~5cells/ml...

【文章頁數(shù)】:52 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖2.1單核細(xì)胞生長狀態(tài)(0h,明場,放大100倍)

圖2.1單核細(xì)胞生長狀態(tài)(0h,明場,放大100倍)

隔3d換液一次,細(xì)胞鋪滿瓶底,傳代。2.2實驗結(jié)果與討論密度梯度離心法得到的單個核細(xì)胞如圖2.1所示。由圖可見,單核細(xì)胞大多呈圓形,細(xì)胞懸浮生長。由圖2.2可見,第n代ADSCs培養(yǎng)24h后有稀疏分布的單個細(xì)胞開始貼壁生長,呈多角形或長梭形散布于瓶底。培養(yǎng)至72h時,貼壁細(xì)胞逐漸....


圖2.2第11代ADSCs生長狀態(tài)(A一ld,B--Zd,c--3d,卜4d,E--sd,P--6d,明場,放大100倍)

圖2.2第11代ADSCs生長狀態(tài)(A一ld,B--Zd,c--3d,卜4d,E--sd,P--6d,明場,放大100倍)

2.2實驗結(jié)果與討論密度梯度離心法得到的單個核細(xì)胞如圖2.1所示。由圖可見,單核細(xì)胞大多呈圓形,細(xì)胞懸浮生長。由圖2.2可見,第n代ADSCs培養(yǎng)24h后有稀疏分布的單個細(xì)胞開始貼壁生長,呈多角形或長梭形散布于瓶底。培養(yǎng)至72h時,貼壁細(xì)胞逐漸增多,貼壁細(xì)胞形成集落,呈漩渦狀、輻....


圖3.4細(xì)胞不同間距CFU一GM擴增倍數(shù)F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneells

圖3.4細(xì)胞不同間距CFU一GM擴增倍數(shù)F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneells

圖3.4細(xì)胞不同間距CFU一GM擴增倍數(shù)F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneellsCFU一GM集落的擴增倍數(shù)與細(xì)胞間距的關(guān)系如圖3.4示?梢姡(xì)胞共培養(yǎng)間距為350協(xié)m時,相應(yīng)的單個核....


圖3.7不同培養(yǎng)方式下擴增的脂肪干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)14、21天后Toluldineblue染色(A,B:陰性對照;C,D:2Week;E,F(xiàn):3week;C,E:恤well間接接觸共培養(yǎng);D,F(xiàn):直接接觸共培養(yǎng))

圖3.7不同培養(yǎng)方式下擴增的脂肪干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)14、21天后Toluldineblue染色(A,B:陰性對照;C,D:2Week;E,F(xiàn):3week;C,E:恤well間接接觸共培養(yǎng);D,F(xiàn):直接接觸共培養(yǎng))

說明由所擴增的細(xì)胞分化成的成骨細(xì)胞具有較好的成骨能力。將不同培養(yǎng)方式擴增的細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化,分別于第7、14、21天行Toluidineblue染色,以第14、21天染色結(jié)果為例,如圖3.7所示!.’.峨{毅’布勺份、一、‘打一‘·’‘氣一l,‘·咨一,."二.;二‘一八....



本文編號:4022699

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