本文關(guān)鍵詞：重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：體外構(gòu)建腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)的重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF載體；利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中；嘗試?yán)眉{米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中。 方法：在人睪丸組織中提取RNA,并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后進(jìn)行高保真PCR擴(kuò)增得到腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,將其克隆入T載體和真核表達(dá)載體EGFP-N1中,通過(guò)菌落PCR、雙酶切及測(cè)序進(jìn)行鑒定后,采用脂質(zhì)體和納米兩種方法分別轉(zhuǎn)入Hela和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中,用熒光顯微鏡和Western blot鑒定轉(zhuǎn)染情況。 結(jié)果：重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF經(jīng)酶切和序列分析鑒定與預(yù)期設(shè)計(jì)一致；利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒成功導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中,并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中有效表達(dá)；嘗試?yán)眉{米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中,并且轉(zhuǎn)染成功,并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中有效表達(dá)。 結(jié)論：成功構(gòu)建重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF載體；熒光顯微鏡下鑒定及Western blot檢測(cè)證實(shí)脂質(zhì)體及納米轉(zhuǎn)染質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF成功。圖15幅,表7個(gè),參考文獻(xiàn)13篇。
【關(guān)鍵詞】：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 基因克隆 轉(zhuǎn)染 脊髓損傷
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料與方法12-27
• 2.1 材料和儀器12-15
• 2.1.1 試劑12
• 2.1.2 主要儀器12-13
• 2.1.3 Western blot分析試劑13-15
• 2.2 方法15-27
• 2.2.1 重組質(zhì)粒載體EGFP-N1-BDNF的構(gòu)建15-22
• 2.2.1.1 目的基因的擴(kuò)增15-16
• 2.2.1.2 載體pUCm-T-BDNF的構(gòu)建及鑒定16-18
• 2.2.1.3 重組表達(dá)質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF的構(gòu)建和鑒定18-22
• 2.2.2 轉(zhuǎn)染22-24
• 2.2.2.1 細(xì)胞換液、培養(yǎng)、種板及傳代22-23
• 2.2.2.2 脂質(zhì)體及PI修飾納米介導(dǎo)兩種質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞23
• 2.2.2.3 脂質(zhì)體及PI修飾納米介導(dǎo)兩種質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染BMSC細(xì)胞23-24
• 2.2.3 Western blot檢測(cè)BDNF基因的表達(dá)情況24-27
• 2.2.3.1 總蛋白的提取24
• 2.2.3.2 SDS-PAGE電泳24-26
• 2.2.3.3 免疫反應(yīng)26
• 2.2.3.4 化學(xué)發(fā)光、顯影、定影26-27
• 第三章 結(jié)果27-37
• 3.1 EGFP-N1-BDNF真核質(zhì)粒載體測(cè)序結(jié)果及酶切鑒定27-29
• 3.2 脂質(zhì)體及納米介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后的免疫熒光鑒定29-31
• 3.2.1 脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后的免疫熒光鑒定29-30
• 3.2.2 納米介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后的免疫熒光鑒定30-31
• 3.3 脂質(zhì)體及納米介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染BMSC細(xì)胞后的免疫熒光鑒定31-33
• 3.3.1 脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染BMSC細(xì)胞后的免疫熒光鑒定31-32
• 3.3.2 納米介導(dǎo)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染BMSC細(xì)胞后的免疫熒光鑒定32-33
• 3.4 Western blot檢測(cè)BDNF蛋白的表達(dá)33-34
• 附圖34-37
• 第四章 討論37-38
• 第五章 結(jié)論38-39
• 第六章 本研究的意義及待解決的問(wèn)題39-40
• 參考文獻(xiàn)40-41
• 綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間主要研究成果52-53
• 致謝53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：397854