發(fā)布時間：2017-05-25 17:19

  本文關(guān)鍵詞：硫化氫參與新生期結(jié)腸炎性刺激誘發(fā)成年大鼠內(nèi)臟痛的分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 （1）研究CBS調(diào)控電壓門控型鈉通道在新生期結(jié)腸炎性刺激誘導的慢性內(nèi)臟痛中的作用； （2）研究去甲腎上腺素（NE）通過CBS調(diào)控辣椒素受體（TRPV1）在新生期結(jié)腸炎性刺激誘導的慢性內(nèi)臟痛中的作用； 方法 1.對出生十天的新生期雄性大鼠在肛門處插入2cm注射0.2ml的0.5%的冰醋酸(AA)造成新生期結(jié)腸炎性刺激(NCI)從而誘導成年大鼠的結(jié)腸慢性痛過敏模型。運用腹壁撤回評分（AWR score）方法評測NCI大鼠的痛行為反應。 2.結(jié)腸管壁注射熒光素（DiI）來標記結(jié)腸特異性背根節(jié)（DRG）神經(jīng)元，運用全細胞膜片鉗方法研究NCI大鼠中腸相關(guān)DRG神經(jīng)元電壓依賴型鈉通道的變化特性。 3.運用ELISA試劑盒檢測NCI模型大鼠血清中去甲腎上腺素（NE）的水平。 4.運用Western Blotting方法檢測NCI模型大鼠腸相關(guān)DRG神經(jīng)元中CBS,鈉通道蛋白和TRPV1受體蛋白表達情況。 結(jié)果 1. NCI明顯增加大鼠對結(jié)腸擴張的過敏反應，六周時，AWR評分顯著高于對照組，這種痛覺反應持續(xù)至少三周。在第十周和第十二周時，AWR評分恢復到正常水平。 2. NCI增加腸相關(guān)DRG神經(jīng)元（T13-L2）電壓門控型鈉通道的電流密度和NaV1.7和NaV1.8的蛋白表達水平。而十周齡時NCI組和對照組的腸相關(guān)DRG神經(jīng)元電壓門控型鈉通道的電流密度和NaV1.7和NaV1.8的蛋白表達水平均沒有顯著差異。同樣地，我們檢測了六周齡NCI組和對照組的非腸相關(guān)神經(jīng)元(L4-5)DRG，發(fā)現(xiàn)電壓門控型鈉通道的電流密度和NaV1.7和NaV1.8的蛋白表達水平均沒有顯著差異免疫組化三標技術(shù)顯示在DRG腸特異性神經(jīng)元中CBS和NaV1.7或NaV1.8共表達。 3.與對照組相比，NCI組CBS的表達水平顯著上調(diào)。CBS的拮抗劑AOAA翻轉(zhuǎn)NCI引起的大鼠內(nèi)臟痛覺反應，最優(yōu)劑量10mg/kg的藥效持續(xù)至少一個小時。并且，，AOAA翻轉(zhuǎn)NCI引起的腸相關(guān)DRG神經(jīng)元鈉電流密度的增加和NaV1.7和NaV1.8的蛋白表達水平的增加。 4.在最佳劑量下，非選擇性β腎上腺素受體拮抗劑，而不是α腎上腺素受體拮抗劑，明顯翻轉(zhuǎn)由HIS誘導的大鼠結(jié)腸痛過敏。進一步研究發(fā)現(xiàn)，阻斷β2腎上腺素受體明顯降低由應激導致的AWR高評分，而β1和β3腎上腺素受體拮抗劑對這種高評分沒有明顯作用。 5. NE參與內(nèi)臟痛敏感的形成。與對照組相比，ELISA結(jié)果顯示，NCI大鼠血清NE激素水平顯著上調(diào)。但是，β2受體蛋白表達水平與對照組相比沒有明顯變化。而且，去甲腎上腺素能誘導大鼠內(nèi)臟痛過敏反應。 6. TRPV1表達水平上調(diào)是由NE介導的。NCI大鼠腸相關(guān)DRG神經(jīng)（T13-L2）中，TRPV1蛋白表達顯著上調(diào)。給予正常大鼠NE，腸相關(guān)DRG神經(jīng)元（T13-L2）中TRPV1的蛋白表達水平顯著上調(diào)。給予NCI組大鼠非選擇性腎上腺素受體β拮抗劑，顯著降低TRPV1蛋白表達水平。用細胞培養(yǎng)的方法，NE孵育正常大鼠的DRG細胞，CBS表達水平顯著上調(diào)。 7. CBS參與NCI-TRPV1痛覺信號通路的傳遞。給予正常大鼠NE，腸相關(guān)DRG神經(jīng)元（T13-L2）中CBS的蛋白表達水平顯著上調(diào)。給予NCI組大鼠非選擇性腎上腺素受體β拮抗劑，顯著降低CBS蛋白表達水平。給予NCI組大鼠CBS拮抗劑AOAA，顯著降低TRPV1蛋白表達水平。 8.用細胞培養(yǎng)的方法，NE孵育正常大鼠的DRG細胞，CBS和TRPV1表達水平顯著上調(diào)。 結(jié)論 NCI可能通過CBS介導的兩條信號通路誘導大鼠內(nèi)臟痛覺過敏。一條通路是，CBS通過介導電壓門控型鈉通道誘導內(nèi)臟痛；另外一條是，NCI誘導產(chǎn)生的去甲腎上腺素可能激活了大鼠初級感覺神經(jīng)元的β2受體，β2受體激活后通過CBS介導腸相關(guān)DRG神經(jīng)元中TRPV1活性的增加誘導內(nèi)臟痛。因此，本研究在一定程度上揭示了功能性胃腸疾病如IBS病人慢性內(nèi)臟痛產(chǎn)生的分子機制，從而可能為慢性內(nèi)臟痛的治療提供更有效的方案。
【關(guān)鍵詞】：腸易激綜合癥 內(nèi)臟痛過敏 腎上腺素受體 H_2S TRPV1受體 電壓門控性鈉通道
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R338
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-9
• 目錄9-12
• 第一章 引言12-14
• 第二章 材料與方法14-26
• 2.1 實驗對象14
• 2.2 新生期結(jié)腸炎性刺激癥（Neonatal Colonic Inflammation ，NCI）模型的建立14
• 2.3 腹壁撤回反射(Abdominal Withdrawal Reflex，AWR) 評分檢測痛閾14-15
• 2.3.1 實驗儀器14
• 2.3.2 實驗方法14
• 2.3.3 給藥方法14
• 2.3.4 實驗用藥14-15
• 2.4 Western Blotting 檢測蛋白表達15-17
• 2.4.1 實驗試劑15-16
• 2.4.2 實驗儀器16
• 2.4.3 實驗方法16-17
• 2.5 急性分離 DRG 神經(jīng)元和全細胞膜片鉗實驗17-20
• 2.5.1 實驗試劑17-18
• 2.5.2 實驗儀器18
• 2.5.3 熒光染料 DiI 標記腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元18
• 2.5.4 急性分離 DRG 神經(jīng)元18-19
• 2.5.5 拉制玻璃微電極：19
• 2.5.6 全細胞膜片鉗記錄：19-20
• 2.6 ELISA 檢測激素水平20-22
• 2.6.1 實驗試劑20-21
• 2.6.2 實驗儀器21
• 2.6.3 準備血清樣本21
• 2.6.4 實驗方法21-22
• 2.7 原代 DRG 細胞培養(yǎng)22-23
• 2.7.1 實驗試劑22
• 2.7.2 實驗儀器22
• 2.7.3 急性分離 DRG 神經(jīng)元22-23
• 2.7.4 培養(yǎng) DRG 神經(jīng)元23
• 2.8 免疫組化23-26
• 2.8.1 實驗試劑23
• 2.8.2 實驗儀器23-24
• 2.8.3 實驗方法24-26
• 第三章 實驗結(jié)果26
• 第一部分 CBS 調(diào)控電壓門控型鈉通道在新生期結(jié)腸炎性刺激誘導的慢性內(nèi)臟痛中的作用26-40
• 3.1 新生期結(jié)腸炎性刺激（Neonatal Colonic Inflammation ，NCI）誘導大鼠內(nèi)臟痛過敏26-27
• 3.2 NCI 增加腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元電壓門控型鈉通道的活性27-29
• 3.2.1 NCI 增加腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元電壓門控型鈉通道的電流密度27-29
• 3.2.2 NCI 增加腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元中 NaV1.7 和 NaV1.8 的蛋白表達水平29
• 3.3 十周齡大鼠腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元電壓門控型鈉通道的活性未發(fā)生改變29-31
• 3.3.1 十周齡大鼠 T13-L2 和六周齡大鼠 L4-5 節(jié)段記錄的鈉電流29-30
• 3.3.2 十周齡大鼠 T13-L2 節(jié)段 NaV1.7 和 NaV1.8 的蛋白表達水平1930-31
• 3.4 NCI 模型中非腸相關(guān) DRG（L4-5）神經(jīng)元電壓門控型鈉通道的活性未發(fā)生改變31-33
• 3.4.1 六周齡大鼠 L4-5 節(jié)段記錄的鈉電流31-33
• 3.4.2 六周齡大鼠 L4-5 節(jié)段 NaV1.7 和 NaV1.8 的蛋白表達水平33
• 3.5 鈉通道參與 NCI 誘導的成年大鼠內(nèi)臟痛是由 CBS 介導的33-40
• 3.5.1 NCI 增加腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元中 CBS 的蛋白表達水平33-34
• 3.5.2 AOAA 翻轉(zhuǎn) NCI 誘導的 NaV1.7 和 NaV1.8 的蛋白表達水平的增加34-35
• 3.5.3 AOAA 翻轉(zhuǎn) NCI 誘導的鈉電流密度的增加35-37
• 3.5.4 CBS 和 NaV1.7、 NaV1.8 在腸相關(guān) DRG 神經(jīng)元中共表達。37-38
• 3.5.5 AOAA 翻轉(zhuǎn)由 NCI 誘導的大鼠內(nèi)臟痛過敏38-40
• 第二部分 去甲腎上腺素（NE）通過 CBS 調(diào)控辣椒素受體（TRPV1）在新生期結(jié)腸炎性刺激誘導的慢性內(nèi)臟痛中的作用40-48
• 3.6 NCI 誘導的大鼠內(nèi)臟痛過敏是由腎上腺素能受體β2介導的40-42
• 3.6.1 非選擇性β腎上腺素受體拮抗劑 Propranolol 明顯翻轉(zhuǎn) HIS 誘導的內(nèi)臟痛過敏40-41
• 3.6.2 選擇性β2腎上腺素受體拮抗劑 Butoxamine 翻轉(zhuǎn) HIS 誘導的內(nèi)臟痛過敏41-42
• 3.7 NE 參與內(nèi)臟痛敏感的形成42-44
• 3.7.1 NCI 增加大鼠血清中 NE 的濃度42-43
• 3.7.2 去甲腎上腺素能誘導大鼠內(nèi)臟痛過敏反應43-44
• 3.8 TRPV1 表達水平和電流增加是由 NE 介導的44-46
• 3.8.1 NCI 增加 TRPV1 的蛋白表達水平和電流44-45
• 3.8.2 NE 介導 TRPV1 表達水平和電流增加45-46
• 3.9 CBS 參與 NCI- TRPV1 痛覺信號通路的傳遞46-47
• 4.0 在離體條件下，NE 增強 CBS 和 TRPV1 的蛋白表達47-48
• 第四章 討論48-51
• 參考文獻51-55
• 綜述55-64
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文、會議摘要和獎勵64-65
• 致謝65-66

【共引文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐驅(qū)波;TNF-α、NGF、負性情緒在Ⅲ型前列腺炎中的作用及相關(guān)性研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

  本文關(guān)鍵詞：硫化氫參與新生期結(jié)腸炎性刺激誘發(fā)成年大鼠內(nèi)臟痛的分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：394448