本文關鍵詞：PCV2b病毒樣顆粒疫苗的制備及檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了研制病毒樣顆粒（VLP）疫苗，我們以豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白（PCV2b-CP）為模型搭建VLP疫苗制備和檢測的技術平臺。采用PCR搭接方法獲得密碼子優(yōu)化的PCV2b-CP編碼基因，并以PET28a為表達載體嘗試在大腸桿菌內可溶性表達PCV2b-CP。采用多種方法對PCV2b-CP的純化及組裝進行摸索同時使用透射電子顯微鏡（TEM）和熒光光譜分析（FSA）兩種方法對VLPs的組裝狀態(tài)進行檢測，，并對形成的VLPs的抗原性及免疫學活性進行了研究。結果顯示：經大腸桿菌表達的可溶性PCV2b-CP可形成與天然病毒相似的VLPs且組裝液成分影響VLPs的組裝狀態(tài)；PCV2b VLP能夠有效誘導小鼠產生PCV2b特異性抗體，具有開發(fā)成PCV2b疫苗的潛能；FSA檢測不同組裝狀態(tài)的VLPs發(fā)現(xiàn)：組裝的PCV2b VLPs的發(fā)射光譜顯示為在320nm處有最高值的非典型曲線，雖FSA不能取代TEM，但其可作為初步檢測是否形成VLP的一種簡便而快速的技術手段。
【關鍵詞】：病毒樣顆粒 PCV2b 衣殼蛋白 疫苗 熒光質譜分析 檢測
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 提要4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 中英文縮寫詞表12-13
• 第1章 緒論13-31
• 1.1 病毒樣顆粒疫苗及其研究進展13-22
• 1.1.1 病毒樣顆粒及其分類13-14
• 1.1.2 病毒樣顆粒的免疫原性14-15
• 1.1.3 病毒樣顆�？乖谋磉_15-18
• 1.1.4 病毒樣顆粒的純化和組裝18-19
• 1.1.5 病毒樣顆粒的鑒定19
• 1.1.6 病毒樣顆粒疫苗的研究進展19-22
• 1.2 豬圓環(huán)病毒及其疫苗的研究進展22-29
• 1.2.1 豬圓環(huán)病毒的特性22-25
• 1.2.2 豬圓環(huán)病毒相關疾病25-26
• 1.2.3 豬圓環(huán)病毒疫苗研究進展26-29
• 1.3 本研究的目的和意義29-31
• 第2章 材料與方法31-45
• 2.1 實驗材料31-33
• 2.1.1 試劑和材料31-32
• 2.1.2 質粒和菌種32
• 2.1.3 培養(yǎng)基32
• 2.1.4 實驗動物32
• 2.1.5 主要實驗設備32-33
• 2.2 引物設計與合成33-34
• 2.3 實驗方法34-45
• 2.3.1 PCV2b-CP 編碼基因的合成及重組質粒的構建34-37
• 2.3.2 重組質粒 pET28a-CP-His 的構建37
• 2.3.3 CP-His 在大腸桿菌中的表達與鑒定37-39
• 2.3.4 重組蛋白 CP-His 的純化方法摸索39-41
• 2.3.5 純化后蛋白 CP-His 的鑒定檢測41-42
• 2.3.6 病毒樣顆粒的組裝及鑒定42-43
• 2.3.7 PCV2b 病毒樣顆粒的活性檢測43-45
• 第3章 實驗結果45-67
• 3.1 PCV2b CP 編碼基因的獲取45-49
• 3.1.1 PCV2b CP 編碼基因的書寫45
• 3.1.2 PCR 搭建方法獲取 A、B 基因片段45-46
• 3.1.3 A、B 基因片段的 T-A 克隆46-47
• 3.1.4 重組質粒 pET28a-CP 的構建47-49
• 3.2 PCV2b CP-His 編碼基因的獲取及基因克隆49-51
• 3.2.1 PCV2b CP-His 編碼基因的獲取49-50
• 3.2.2 PCV2b CP-His 編碼基因的 T-A 克隆50
• 3.2.3 pET28a-CP-His 重組質粒的構建50-51
• 3.3 重組蛋白 CP-His 在大腸桿菌內表達及鑒定51-52
• 3.4 CP-His 蛋白純化條件的摸索52-58
• 3.4.1 分子篩層析法純化53-54
• 3.4.2 硫酸銨沉淀法純化54-55
• 3.4.3 鎳親和層析法純化55-58
• 3.5 Western blot 檢測純化后 CP-His58-59
• 3.6 不同條件下 VLP 的組裝及檢測59-63
• 3.6.1 CP-His 的組裝和透射電鏡方法檢測 VLP59-61
• 3.6.2 熒光質譜分析法檢測 VLPs61-63
• 3.7 PCV2b VLPs 疫苗的活性檢測63-67
• 3.7.1 PCV2b VLPs 的抗原性檢測64
• 3.7.2 PCV2b VLPs 誘導小鼠產生 PCV2b 特異性抗體的效力64-67
• 第4章 討論67-73
• 4.1 CP-His 編碼基因的輸寫67-68
• 4.2 CP-His 純化的影響因素68-70
• 4.3 CP-His 組裝的影響因素70-71
• 4.4 FSA 檢測 VLP 組裝與去組裝的可行性71-72
• 4.5 VLPs 的活性檢測72-73
• 第5章 結論73-75
• 參考文獻75-89
• 作者簡介及科研成果89-91
• 致謝91-92

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關鍵詞：PCV2b病毒樣顆粒疫苗的制備及檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：393087