本文關鍵詞：特應性皮炎患者血清炎癥因子檢測及皮損樹突狀細胞體外誘導模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：特應性皮炎(atopic dermatitis，AD)是一種常見的復發(fā)性、瘙癢性、炎癥性皮膚病，嚴重影響著兒童(25%)及成人(1-3%)的生活質量。本病發(fā)病機制復雜，可能涉及皮膚屏障功能障礙、固有免疫及獲得免疫功能紊亂、遺傳因素等多方面因素的共同作用。皮膚屏障功能障礙是AD患者發(fā)病的重要因素，并且具有遺傳傾向。受損的皮膚導致多種外來抗原進入皮膚并激活皮膚樹突狀細胞(dendritic cell, DC)，在本病發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。 根據免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)是否參與發(fā)病,通常將本病分為外源性和內源性兩種。外源性AD患者皮損表皮出現朗格漢斯細胞(Langerhans’cells，LCs)和炎癥性樹突狀表皮細胞(inflammatory dendritic epidermal cell，IDECs)兩種樹突狀細胞，而非皮損區(qū)的表皮只有LCs。作為抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)，它不僅可以調節(jié)T細胞的反應類型及程度，還在AD等T細胞主導的炎癥性疾病中起著決定性的作用。 Toll樣受體(Toll-like receptors, TLR s)包括11種亞型，不同程度地表達于各種細胞表面。DC表面的TLRs構成一類獨特的模式識別受體(pattern recognition receptors,PRRs),能選擇性地識別病原微生物所攜帶的病原相關分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns, PAMPs)并通過激活細胞內核轉錄因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號，促進大量炎癥因子釋放，最終使機體啟動針對病原微生物的適應性免疫應答。皮膚角質形成細胞及炎癥細胞(包括DC)均不同程度表達TLRs。作為人體屏障的皮膚，不斷受到外界各種微生物和變應原的刺激。已有研究證實，皮損局部IDECs數量與濕疹嚴重程度相關。 IgE在外源性AD的發(fā)病中起著重要作用，而IgE高親和力受體(high-affinityIgE receptor, FCεRⅠ)及IgE低親和力受體(low-affinity IgE receptor, CD23)是體內IgE發(fā)揮作用的主要途徑。皮損區(qū)的兩種樹突狀細胞表面FCεRⅠ表達水平顯著高于非皮損區(qū)。已有研究表明FCεRⅠ在皮膚變態(tài)反應的啟動、發(fā)展及維持中發(fā)揮重要作用。在皮損局部，LCs僅產生少量種類的炎癥趨化因子，幾乎不產生促炎癥細胞因子。而IDECs表面FCεRⅠ交聯(lián)可產生大量IL-12和IL-18以及促炎癥細胞因子，，同時導致局部免疫反應向Th1極化。AD患者外周血白細胞介素(interleukin， IL)-4、IL-10、γ干擾素(interferon-γ, IFN-γ)、轉化生長因子(transforming growth factor，TGF)-β1水平在不同階段發(fā)生變化。但尚不明確這些炎癥因子與皮疹嚴重程度是否具有相關性。 此外，由于LCs、IDECs在體內數目極少，限制了對其功能的深入研究。國內外也有研究利用AD患者外周血單核細胞在體外成功誘導了LC樣樹突狀細胞(Langerhans’cells like dendritic cell, LC-DC)和IDEC樣樹突狀細胞(inflammatorydendritic epidermal cells like dendritic cell, IDEC-DC)，但目前尚缺乏健康人群和AD患者外周血單核細胞誘導的兩種細胞在相關表面分子表達差異的研究。因此，建立LCs和IDECs體外誘導培養(yǎng)體系無疑將豐富本領域的知識，并為研究這兩種細胞在包括AD等炎癥性疾病發(fā)病機制中的作用打下基礎。 本研究我們比較AD和健康對照組外周血炎癥因子差異并建立了人外周血來源特應性皮炎皮損表皮DC體外培養(yǎng)體系，為后續(xù)深入研究打下基礎。 第一部分：AD患者外周血炎癥細胞因子的測定及與皮疹嚴重程度相關性研究 采集血樣后引導AD患者及志愿者填寫患者濕疹嚴重程度自我評價(thePatient-Oriented Eczema Measure，POEM)問券。ELISA法檢測外周血IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量。比較AD組細胞因子與健康對照組之間的差異，并研究其表達水平與皮疹嚴重程度的相關性。結果：AD患者外周血IL-4較健康對照組高，IFN-γ、TGF-β1較健康對照組低。IL-4與POEM評分呈正相關(r=0.6123, P 0.0090)。TGF-β1與POEM評分呈負相關(P=0.0410, r=-0.4633)。結論：AD患者外周血IL-4升高且與皮疹嚴重程度呈正相關，TGF-β1水平降低與皮疹嚴重程度呈負相關。這為臨床上預測AD病情發(fā)展及轉歸提供了參考依據。 第二部分：AD患者外周血單核細胞表面分子的測定 聯(lián)合應用人淋巴細胞分離液和CD14+免疫磁珠分離和篩選外周血CD14+單核細胞；并采用流式細胞儀(fluorescence-activated cell Sorter，FACS)檢測細胞表面抗原熒光抗體染色后CD14+單核細胞表面FCεRⅠ、CD23、TLR2、TLR1的表達以明確單核細胞的純度和表型特點。結果：AD患者CD14+單核細胞表面FCεRⅠ、CD23表達水平顯著高于健康對照組，TLR1表達較低，且均具有統(tǒng)計學差異；TLR2表達水平無顯著差異。結論：AD患者體內單核細胞表面FCεRI、CD23表達水平顯著高于健康對照組，TLR1表達低于健康對照組。 第三部分：AD皮損表皮樹突狀細胞體外誘導培養(yǎng)體系的建立 在GM-CSF、IL-4的基礎上分別于第0、2、4天加入TGF-β誘導CD14+單核細胞分化為LC-DC。在GM-CSF、IL-4的基礎上加入2-ME誘導IDEC-DC。分別于第0、3、6天倒置熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，于培養(yǎng)第6天收集細胞。采用FACS檢測細胞表面抗原熒光抗體染色后LC-DC及IDEC-DC的純度并分析其表型特點。結果：CD14+單核細胞體外誘導培養(yǎng)6天后可形成具有樹突狀外觀的LC-DC及IDEC-DC，兩種細胞均不同程度表達CD1a、FCεRⅠ、TLR1、TLR2；LC-DC表達CD207，IDEC-DC表達CD206。特應性皮炎患者來源的IDEC-DC表面CD1a表達高于LC-DC，且CD23、TLR2、FCεRⅠ的表達水平顯著高于健康對照組。結論:利用外周血單核細胞可在體外成功誘導LC-DC和IDEC-DC，為體外進一步研究這兩類細胞的功能打下基礎。 綜上所述，我們的研究表明:①AD患者外周血IL-4升高且與皮疹嚴重程度呈正相關，TGF-β1水平降低與皮疹嚴重程度呈負相關。這為臨床上預測AD病情發(fā)展及轉歸提供了參考依據。②人外周血單核細胞在體外可成功誘導特應性皮炎皮損樹突狀細胞，其形態(tài)及表型特點與體內分離的細胞類似，可模擬損處DC的病理狀態(tài)。為體外進一步研究這兩類細胞的功能打下基礎。
【關鍵詞】：朗格漢斯細胞 炎癥性樹突狀表皮細胞 特應性皮炎 樹突狀細胞IgE高親和力受體 Toll樣受體
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R758.2
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 AD 患者外周血炎癥細胞因子的測定及與皮疹嚴重程度相關性研究14-26
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.2 結果17-23
• 2.3 討論23-24
• 2.4 小結24-26
• 第三章 人外周血單核細胞的分離及表型分析26-37
• 3.1 材料與方法26-29
• 3.2 結果29-34
• 3.3 討論34-36
• 3.4 小結36-37
• 第四章 AD 皮損表皮樹突狀細胞體外誘導培養(yǎng)體系的建立37-55
• 4.1 材料與方法37-39
• 4.2 結果39-51
• 4.3 討論51-54
• 4.4 小結54-55
• 全文總結55
• 不足與展望55-56
• 參考文獻56-65
• 文獻綜述 樹突狀細胞在特應性皮炎發(fā)病中的研究進展65-72
• 參考文獻69-72
• 在讀期間發(fā)表文章72-73
• 致謝73

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 吳江;李常興;徐慧青;;特應性皮炎患者血清中IL-10I、gE水平變化及其臨床意義[J];皮膚性病診療學雜志;2012年01期

2 曾波;陳金;;特應性皮炎研究進展[J];實用醫(yī)院臨床雜志;2012年02期

  本文關鍵詞：特應性皮炎患者血清炎癥因子檢測及皮損樹突狀細胞體外誘導模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：392839