本文關(guān)鍵詞：特應(yīng)性皮炎患者血清炎癥因子檢測(cè)及皮損樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis，AD)是一種常見的復(fù)發(fā)性、瘙癢性、炎癥性皮膚病，嚴(yán)重影響著兒童(25%)及成人(1-3%)的生活質(zhì)量。本病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能涉及皮膚屏障功能障礙、固有免疫及獲得免疫功能紊亂、遺傳因素等多方面因素的共同作用。皮膚屏障功能障礙是AD患者發(fā)病的重要因素，并且具有遺傳傾向。受損的皮膚導(dǎo)致多種外來(lái)抗原進(jìn)入皮膚并激活皮膚樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)，在本病發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。 根據(jù)免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)是否參與發(fā)病,通常將本病分為外源性和內(nèi)源性兩種。外源性AD患者皮損表皮出現(xiàn)朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans’cells，LCs)和炎癥性樹突狀表皮細(xì)胞(inflammatory dendritic epidermal cell，IDECs)兩種樹突狀細(xì)胞，而非皮損區(qū)的表皮只有LCs。作為抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)，它不僅可以調(diào)節(jié)T細(xì)胞的反應(yīng)類型及程度，還在AD等T細(xì)胞主導(dǎo)的炎癥性疾病中起著決定性的作用。 Toll樣受體(Toll-like receptors, TLR s)包括11種亞型，不同程度地表達(dá)于各種細(xì)胞表面。DC表面的TLRs構(gòu)成一類獨(dú)特的模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors,PRRs),能選擇性地識(shí)別病原微生物所攜帶的病原相關(guān)分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns, PAMPs)并通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號(hào)，促進(jìn)大量炎癥因子釋放，最終使機(jī)體啟動(dòng)針對(duì)病原微生物的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及炎癥細(xì)胞(包括DC)均不同程度表達(dá)TLRs。作為人體屏障的皮膚，不斷受到外界各種微生物和變應(yīng)原的刺激。已有研究證實(shí)，皮損局部IDECs數(shù)量與濕疹嚴(yán)重程度相關(guān)。 IgE在外源性AD的發(fā)病中起著重要作用，而IgE高親和力受體(high-affinityIgE receptor, FCεRⅠ)及IgE低親和力受體(low-affinity IgE receptor, CD23)是體內(nèi)IgE發(fā)揮作用的主要途徑。皮損區(qū)的兩種樹突狀細(xì)胞表面FCεRⅠ表達(dá)水平顯著高于非皮損區(qū)。已有研究表明FCεRⅠ在皮膚變態(tài)反應(yīng)的啟動(dòng)、發(fā)展及維持中發(fā)揮重要作用。在皮損局部，LCs僅產(chǎn)生少量種類的炎癥趨化因子，幾乎不產(chǎn)生促炎癥細(xì)胞因子。而IDECs表面FCεRⅠ交聯(lián)可產(chǎn)生大量IL-12和IL-18以及促炎癥細(xì)胞因子，，同時(shí)導(dǎo)致局部免疫反應(yīng)向Th1極化。AD患者外周血白細(xì)胞介素(interleukin， IL)-4、IL-10、γ干擾素(interferon-γ, IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor，TGF)-β1水平在不同階段發(fā)生變化。但尚不明確這些炎癥因子與皮疹嚴(yán)重程度是否具有相關(guān)性。 此外，由于LCs、IDECs在體內(nèi)數(shù)目極少，限制了對(duì)其功能的深入研究。國(guó)內(nèi)外也有研究利用AD患者外周血單核細(xì)胞在體外成功誘導(dǎo)了LC樣樹突狀細(xì)胞(Langerhans’cells like dendritic cell, LC-DC)和IDEC樣樹突狀細(xì)胞(inflammatorydendritic epidermal cells like dendritic cell, IDEC-DC)，但目前尚缺乏健康人群和AD患者外周血單核細(xì)胞誘導(dǎo)的兩種細(xì)胞在相關(guān)表面分子表達(dá)差異的研究。因此，建立LCs和IDECs體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系無(wú)疑將豐富本領(lǐng)域的知識(shí)，并為研究這兩種細(xì)胞在包括AD等炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制中的作用打下基礎(chǔ)。 本研究我們比較AD和健康對(duì)照組外周血炎癥因子差異并建立了人外周血來(lái)源特應(yīng)性皮炎皮損表皮DC體外培養(yǎng)體系，為后續(xù)深入研究打下基礎(chǔ)。 第一部分：AD患者外周血炎癥細(xì)胞因子的測(cè)定及與皮疹嚴(yán)重程度相關(guān)性研究 采集血樣后引導(dǎo)AD患者及志愿者填寫患者濕疹嚴(yán)重程度自我評(píng)價(jià)(thePatient-Oriented Eczema Measure，POEM)問(wèn)券。ELISA法檢測(cè)外周血IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量。比較AD組細(xì)胞因子與健康對(duì)照組之間的差異，并研究其表達(dá)水平與皮疹嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果：AD患者外周血IL-4較健康對(duì)照組高，IFN-γ、TGF-β1較健康對(duì)照組低。IL-4與POEM評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.6123, P 0.0090)。TGF-β1與POEM評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P=0.0410, r=-0.4633)。結(jié)論：AD患者外周血IL-4升高且與皮疹嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，TGF-β1水平降低與皮疹嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。這為臨床上預(yù)測(cè)AD病情發(fā)展及轉(zhuǎn)歸提供了參考依據(jù)。 第二部分：AD患者外周血單核細(xì)胞表面分子的測(cè)定 聯(lián)合應(yīng)用人淋巴細(xì)胞分離液和CD14+免疫磁珠分離和篩選外周血CD14+單核細(xì)胞；并采用流式細(xì)胞儀(fluorescence-activated cell Sorter，F(xiàn)ACS)檢測(cè)細(xì)胞表面抗原熒光抗體染色后CD14+單核細(xì)胞表面FCεRⅠ、CD23、TLR2、TLR1的表達(dá)以明確單核細(xì)胞的純度和表型特點(diǎn)。結(jié)果：AD患者CD14+單核細(xì)胞表面FCεRⅠ、CD23表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，TLR1表達(dá)較低，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；TLR2表達(dá)水平無(wú)顯著差異。結(jié)論：AD患者體內(nèi)單核細(xì)胞表面FCεRI、CD23表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，TLR1表達(dá)低于健康對(duì)照組。 第三部分：AD皮損表皮樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系的建立 在GM-CSF、IL-4的基礎(chǔ)上分別于第0、2、4天加入TGF-β誘導(dǎo)CD14+單核細(xì)胞分化為L(zhǎng)C-DC。在GM-CSF、IL-4的基礎(chǔ)上加入2-ME誘導(dǎo)IDEC-DC。分別于第0、3、6天倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，于培養(yǎng)第6天收集細(xì)胞。采用FACS檢測(cè)細(xì)胞表面抗原熒光抗體染色后LC-DC及IDEC-DC的純度并分析其表型特點(diǎn)。結(jié)果：CD14+單核細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)6天后可形成具有樹突狀外觀的LC-DC及IDEC-DC，兩種細(xì)胞均不同程度表達(dá)CD1a、FCεRⅠ、TLR1、TLR2；LC-DC表達(dá)CD207，IDEC-DC表達(dá)CD206。特應(yīng)性皮炎患者來(lái)源的IDEC-DC表面CD1a表達(dá)高于LC-DC，且CD23、TLR2、FCεRⅠ的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組。結(jié)論:利用外周血單核細(xì)胞可在體外成功誘導(dǎo)LC-DC和IDEC-DC，為體外進(jìn)一步研究這兩類細(xì)胞的功能打下基礎(chǔ)。 綜上所述，我們的研究表明:①AD患者外周血IL-4升高且與皮疹嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，TGF-β1水平降低與皮疹嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。這為臨床上預(yù)測(cè)AD病情發(fā)展及轉(zhuǎn)歸提供了參考依據(jù)。②人外周血單核細(xì)胞在體外可成功誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎皮損樹突狀細(xì)胞，其形態(tài)及表型特點(diǎn)與體內(nèi)分離的細(xì)胞類似，可模擬損處DC的病理狀態(tài)。為體外進(jìn)一步研究這兩類細(xì)胞的功能打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：朗格漢斯細(xì)胞 炎癥性樹突狀表皮細(xì)胞 特應(yīng)性皮炎 樹突狀細(xì)胞IgE高親和力受體 Toll樣受體
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R758.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 AD 患者外周血炎癥細(xì)胞因子的測(cè)定及與皮疹嚴(yán)重程度相關(guān)性研究14-26
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.2 結(jié)果17-23
• 2.3 討論23-24
• 2.4 小結(jié)24-26
• 第三章 人外周血單核細(xì)胞的分離及表型分析26-37
• 3.1 材料與方法26-29
• 3.2 結(jié)果29-34
• 3.3 討論34-36
• 3.4 小結(jié)36-37
• 第四章 AD 皮損表皮樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系的建立37-55
• 4.1 材料與方法37-39
• 4.2 結(jié)果39-51
• 4.3 討論51-54
• 4.4 小結(jié)54-55
• 全文總結(jié)55
• 不足與展望55-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 文獻(xiàn)綜述 樹突狀細(xì)胞在特應(yīng)性皮炎發(fā)病中的研究進(jìn)展65-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 在讀期間發(fā)表文章72-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 吳江;李常興;徐慧青;;特應(yīng)性皮炎患者血清中IL-10I、gE水平變化及其臨床意義[J];皮膚性病診療學(xué)雜志;2012年01期

2 曾波;陳金;;特應(yīng)性皮炎研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)院臨床雜志;2012年02期

  本文關(guān)鍵詞：特應(yīng)性皮炎患者血清炎癥因子檢測(cè)及皮損樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：392839