本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒的適應(yīng)性傳代及規(guī)�；囵B(yǎng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究目的是完成乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）在Vero細胞上的適應(yīng)性、傳代穩(wěn)定性研究及病毒培養(yǎng)條件的優(yōu)化。 將JEV在Vero細胞上連續(xù)適應(yīng)性傳代20代次，，通過檢測各代次毒力，考察JEV在Vero細胞上的適應(yīng)情況；結(jié)果顯示，JEV在Vero細胞上適應(yīng)性良好，所傳各代次病毒滴度均大于8.5lgLD50/ml。 以RT-PCR法擴增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代次病毒的E基因片段，測序分析，考察JEV在Vero細胞上的遺傳穩(wěn)定性；結(jié)果顯示，E基因片段測序分析未發(fā)生堿基變化，傳代穩(wěn)定性良好。 病毒靜置培養(yǎng)狀態(tài)下，實現(xiàn)培養(yǎng)規(guī)模放大，改變包括維持液pH值、培養(yǎng)溫度、病毒感染復數(shù)（Multiplicity of infection，MOI）及培養(yǎng)方式在內(nèi)的相關(guān)影響因素，優(yōu)化病毒培養(yǎng)模式；建立JEV二級毒種庫，并進行全面檢定。結(jié)果顯示，當病毒維持液pH值為7.2~7.4、培養(yǎng)溫度為34℃、病毒接種MOI為0.01或0.1且以單層接種法接種病毒時，病毒滴度最高。完成JEV在Vero細胞上的適應(yīng)性傳代培養(yǎng)，為實現(xiàn)Vero細胞基質(zhì)的JEV疫苗研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：乙型腦炎病毒 Vero細胞 感染復數(shù) 毒種庫
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R373.31
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 緒論8-18
• 1.1 乙型腦炎病毒病原學研究進展8-9
• 1.2 乙型腦炎發(fā)病機制9
• 1.3 乙型腦炎的診斷9-10
• 1.4 乙型腦炎疫苗研究進展10-11
• 1.4.1 傳統(tǒng)疫苗10
• 1.4.2 新型疫苗10-11
• 1.5 Vero 細胞及其在病毒性疫苗研發(fā)中的應(yīng)用11-12
• 1.5.1 Vero 細胞的特性11-12
• 1.5.2 Vero 細胞的應(yīng)用12
• 1.6 生物反應(yīng)器動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)12-16
• 1.6.1 生物反應(yīng)器技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀13-14
• 1.6.2 生物反應(yīng)器的類型及特點14-15
• 1.6.3 反應(yīng)器細胞培養(yǎng)工藝和代謝調(diào)控研究15-16
• 1.7 課題的立題依據(jù)16-17
• 1.8 課題研究的主要內(nèi)容17-18
• 第2章 乙型腦炎病毒的適應(yīng)性傳代18-30
• 2.1 材料與方法18-19
• 2.1.1 細胞、病毒與試劑18
• 2.1.2 實驗動物18-19
• 2.2 方法與結(jié)果19-29
• 2.2.1 乙型腦炎病毒病在 Vero 細胞上傳代適應(yīng)19-20
• 2.2.2 乙型腦炎病毒病靜置培養(yǎng)條件的研究20-23
• 2.2.3 乙型腦炎病毒病接種方式的研究23
• 2.2.4 病毒培養(yǎng)規(guī)模放大研究23-24
• 2.2.5 乙型腦炎病毒病傳代穩(wěn)定性研究24-26
• 2.2.6 病毒庫的建立與檢定26-29
• 2.3 本章小結(jié)29-30
• 第3章 生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)30-35
• 3.1 儀器及試劑30-31
• 3.2 方法與結(jié)果31-35
• 3.2.1 Vero 細胞的接種與培養(yǎng)31-32
• 3.2.2 乙型腦炎病毒的接種與培養(yǎng)32-35
• 第4章 討論35-39
• 4.1 乙型腦炎病毒適應(yīng)性傳代及相關(guān)研究35-37
• 4.1.1 病毒的適應(yīng)性傳代35
• 4.1.2 乙型腦炎病毒培養(yǎng)條件的優(yōu)化35-37
• 4.2 乙型腦炎病毒的生物反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)37-39
• 4.2.1 Vero 細胞的培養(yǎng)37
• 4.2.2 乙型腦炎病毒的培養(yǎng)37-39
• 第5章 總結(jié)39-40
• 5.1 乙型腦炎病毒的適應(yīng)性傳代研究39
• 5.2 最佳培養(yǎng)條件的研究39
• 5.3 乙型腦炎病毒規(guī)�；囵B(yǎng)的研究39-40
• 參考文獻40-43
• 致謝43

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本文編號：392846