本文關(guān)鍵詞：超抗原SEA拮抗伊馬替尼阻斷TCR信號通路機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 研究超抗原金黃色葡萄球菌腸毒素A（SEA）在活化T細(xì)胞過程中，對TCR信號通路相關(guān)激酶轉(zhuǎn)錄與蛋白表達(dá)的影響；從分子水平探討SEA能否拮抗伊馬替尼對T細(xì)胞的免疫抑制作用。方法: 1.不同濃度SEA刺激T系細(xì)胞株（Jurkat和Molt4）后，用qRT-PCR以及Westernblotting分別檢測TCR信號通路相關(guān)激酶Lck、Fyn、ZAP70的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)的變化。 2.以Jurkat和正常人外周血T細(xì)胞為實驗對象，根據(jù)是否用SEA（20ng/mL）預(yù)處理細(xì)胞24h分為兩組，繼而用伊馬替尼（40nmol/L）處理1h，并設(shè)置空白對照。實驗分為空白對照(control)、SEA單獨處理（SEA）、伊馬替尼單獨處理(IM)、SEA預(yù)刺激24h后用伊馬替尼處理1h（SEA+IM）四個組。用抗CD3/CD28抗體刺激細(xì)胞24h后，ELISA檢測IL-2表達(dá)水平，CCK-8檢測細(xì)胞增殖活性；抗CD3/CD28抗體刺激15min，，Western blotting檢測Lck、ZAP70、LAT、PLCγ1的磷酸化情況。結(jié)果: 1.10ng/ml SEA刺激Jurkat及Molt4細(xì)胞24h后，在轉(zhuǎn)錄水平上，二者變化相似，上調(diào)細(xì)胞Lck，下調(diào)ZAP70，對Fyn無影響。 2. SEA刺激Jurkat細(xì)胞24h后，上調(diào)Lck、ZAP70的蛋白表達(dá)，且具有劑量依賴性，對Fyn無影響。 3. CD3/CD28聯(lián)合單抗激活Jurkat及外周血T細(xì)胞的TCR信號通路，誘導(dǎo)激酶Lck、ZAP70、LAT、PLCγ磷酸化；伊馬替尼抑制CD3/CD28誘導(dǎo)的Lck、ZAP70、LAT、PLCγ激酶的磷酸化，抑制T細(xì)胞的增殖與IL-2的分泌，SEA能拮抗伊馬替尼的這些抑制效應(yīng)。結(jié)論: SEA可以刺激T細(xì)胞上調(diào)Lck、ZAP70的mRNA與蛋白表達(dá)；SEA通過上調(diào)TCR通路激酶Lck、ZAP70、LAT、PLCγⅠ磷酸化水平拮抗伊馬替尼對T細(xì)胞的免疫抑制效應(yīng)；Lck的表達(dá)量起到調(diào)控T細(xì)胞活化閾值的作用，上調(diào)Lck表達(dá)量降低TCR活化閾值，抑制Lck則升高TCR活化閾值。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌腸毒素A（SEA） 伊馬替尼（imatinib） T細(xì)胞受體（TCR） 實時定量PCR 蛋白質(zhì)印跡 Lck激酶 ZAP70
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 一 前言8-19
• 1. CML 的治療概述8-11
• 2. 伊馬替尼抑制免疫應(yīng)答的機(jī)制11-15
• 3. 超抗原簡介15-17
• 4. 研究的可行性分析及意義17-19
• 二 材料與方法19-34
• 1. 實驗耗材、試劑與設(shè)備19-22
• 2. 實驗方法22-26
• 3. 第一部分實驗步驟26-32
• 4. 第二部分實驗步驟32-33
• 5. 實驗數(shù)據(jù)分析33-34
• 三 結(jié)果34-45
• 1 第一部分實驗結(jié)果34-39
• 2 第二部分實驗結(jié)果39-45
• 四 討論45-49
• 1. TCR 上游信號通路蛋白分子表達(dá)與 T 細(xì)胞活性45-46
• 2. IM 對 LCK、FYN、ZAP70 激酶影響46-47
• 3. SEA 對 LCK、FYN、ZAP70 激酶影響47
• 4. SEA 拮抗 IM 免疫抑制 LCK、FYN、ZAP70 激酶的作用47-48
• 5. LCK 是調(diào)控 T 細(xì)胞活化的重要因素48-49
• 五 展望49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 英文縮略詞54-56
• 附錄一 在校期間發(fā)表的論文56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 高珂;林晨;白雪;陳少華;楊力建;陳思;B.N.Selvakumar;李揚秋;;SEA對PML-RARα多肽體外誘導(dǎo)外周血單個核細(xì)胞TCRζ鏈表達(dá)的作用[J];暨南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

2 高永鵬;林晨;田紅霞;高珂;郜世雋;江振友;陳少華;沈琦;李揚秋;;SEA聯(lián)合K562細(xì)胞體外誘導(dǎo)正常人臍帶血單核細(xì)胞TCRζ鏈表達(dá)的作用[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2010年02期

3 高永鵬;林晨;田紅霞;陳琛;秦雅楠;周羽z

本文編號：390316