本課題的研究目標是對流感病毒血凝素轉(zhuǎn)位結(jié)構域（HA2）進行截短和突變，篩選獲得長度最短、轉(zhuǎn)位功能較強的HA2優(yōu)化短肽，用于靶向促凋亡分子的構建。在本課題組前期的工作中，已將HA2引入到靶向促凋亡分子中，體內(nèi)外實驗證實其具有轉(zhuǎn)位活性，能夠促進殺傷效應分子從內(nèi)吞體轉(zhuǎn)位到胞漿，增強抗腫瘤作用。在此基礎上，本研究對HA2進行改構優(yōu)化，設計獲得了6種截短體和3種突變體，通過體外紅細胞溶解實驗、腫瘤細胞殺傷實驗和熒光共振能量轉(zhuǎn)移實驗（FRET）比較這些HA2截短體/突變體的轉(zhuǎn)位功能強弱。首先，我們利用體外紅細胞溶解實驗對HA2改構體進行功能篩選，如果破壞紅 細胞膜的能力越強，就會導致上清中血紅蛋白含量越高，表明HA2改構體的轉(zhuǎn)位功能越強。以野生型HA2作為對照，將合成的上述9種HA2截短體/突變體與分離的人外周血紅細胞相孵育。劑量效應實驗和時間效應實驗的結(jié)果均表明，在相同條件下E5C3的溶血能力強于HA2，E5弱于HA2，并且呈現(xiàn)出時間依賴關系和某種程度的劑量依賴關系。羧基端的3個截短體C3、C15、C8中，僅C3具有溶血能力，提示HA2的2個螺旋區(qū)對于溶血功能至關重要，去掉一個或兩個均會使HA2...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-2pCMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBid的酶切鑒定圖譜

e23sFvFdttApaⅠNotⅠtBidXhaⅠHindⅢ圖2-1重組載體結(jié)構示意圖MarkerHindⅢ+ApaⅠHindⅢ+NotⅠNotⅠ+XbaⅠXbaⅠ+A

圖2-3包含HA2截短體/突變體的重組載體酶切鑒定圖譜（均用HindⅢ+ApaⅠ酶切）100

-3包含HA2截短體/突變體的重組載體酶切鑒定圖譜（均用HindⅢ+ACMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBid;CMV-e23sFv-Fdt....

圖2-4包含HA2截短體/突變體的靶向促凋亡分子誘導BT474細胞凋亡裸細胞pCMV-e23sFv-Fdt-E5C3M7-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-tBiddpCMV

為：E5C310.38%±0.0042>HA28.6%±0.0031>Null5.01%±0.0044>E5C3M74.98%±0.0055>C....

圖2-6包含HA2截短體/突變體的靶向促凋亡分子誘導SKBR3細胞凋亡裸細胞pCMV-e23sFv-Fdt-E5C3M7-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-tBiddpCMV

第四軍醫(yī)大學碩士學位論文pCMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-M7-tBidpCMV-e23sFv-....

本文編號：3897137