本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路在大鼠膽管梗阻再通模型中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、背景和目的 梗阻性黃疸是外科的急重癥,造成肝臟嚴重損害。即使有效解除梗阻,肝功能恢復(fù)正常仍需較長時間,嚴重者可導(dǎo)致不可逆性肝損害。目前尚無系統(tǒng)地基礎(chǔ)研究觀察梗阻性黃疸對肝細胞損害以及梗阻解除后肝臟恢復(fù)的動態(tài)過程。缺乏以此為依據(jù)的客觀臨床治療方案。 炎癥是梗阻性黃疸的特征性病變,包括門脈水腫、中性粒細胞浸潤、膽道上皮細胞增殖,最終導(dǎo)致門脈纖維化等形態(tài)學(xué)改變。隨著黃疸導(dǎo)致的炎癥進一步進展,肝細胞損害逐漸加重,成熟的和新生的膽管上皮細胞和肝臟干細胞開始增殖和修復(fù)過程。最新研究證實,膽管上皮實質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化在組織的重建過程中起關(guān)鍵作用。當(dāng)然,過度增殖導(dǎo)致肝臟的結(jié)構(gòu)的紊亂、影響肝臟功能,有惡變的可能。Hedgehog信號傳導(dǎo)通路對細胞分化、生長,以及腫瘤的發(fā)生有重要意義。有研究表明,它還有可能在某些肝臟病變中起調(diào)控肝臟干細胞增殖和上皮實質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化修復(fù)過程的關(guān)鍵作用。 因此,本研究通過結(jié)扎Wistar大鼠膽總管,造成膽管梗阻,并通過置入硅膠管造成體外引流以解除梗阻,模擬膽管梗阻再通的病理狀態(tài),通過免疫組化、PCR技術(shù),探討Hedgehog信號傳導(dǎo)通路在調(diào)控肝臟損傷修復(fù)過程中的表達、作用及調(diào)控機制,為進一步從治療上干預(yù)肝臟修復(fù)的過程提供科學(xué)依據(jù)。 二、材料與方法 雄性Wister大鼠150只,體重250-300克,隨機分為3組。探查組(對照組)：行對照手術(shù),分離、探查膽管但不結(jié)扎；梗阻組：行肝門部膽道結(jié)扎術(shù)；梗阻再通組(梗通組)：膽道結(jié)扎后7天行再通術(shù)。分別以大鼠初次術(shù)后1、3、7、8、10、14天處死,取血及肝臟標(biāo)本,每組每個時間點造成功6只。血標(biāo)本取自處死時腹主動脈血,肝臟標(biāo)本：處死時取肝右葉應(yīng)用4%福爾馬林固定,留作組織學(xué)分析,取肝左葉-70℃凍存,留作PCR監(jiān)測。 1、通過肝功能(TBIL、DBIL、ALT、AST)觀察不同時間點肝臟的炎癥反應(yīng)。 2、通過肉眼及HE染色觀察膽管梗阻再通不同時間點時肝臟形態(tài)改變。 3、免疫組化(Ptchl)評價蛋白水平Hedgehog信號傳導(dǎo)通路的表達。 4、PCR檢測各目的基因：Hedgehog信號傳導(dǎo)通路(Ptchl, Gli2)及肝臟修復(fù)、纖維化進程的相關(guān)基因(TGF-β1),觀察其在不同時間點的表達。 三、結(jié)果 1、肝功能結(jié)果 對照組各個時間點間無明顯差異。TBIL及DBIL在梗阻1-3天內(nèi)呈上升趨勢,3-7天呈緩慢增長甚至呈下降趨勢；再通后0-1天內(nèi)呈上升趨勢,之后呈逐步下降趨勢。兩實驗組中ALT及AST在1-8天呈下降趨勢,梗通組8-10天逐漸上升,之后逐步下降,梗阻組手術(shù)8天后呈下降、趨緩態(tài)勢。 2、大體結(jié)果 對照組肝臟標(biāo)本各肝葉色澤紅潤、表面光滑。梗阻組可見肝臟黃染、腫脹、淤血、水腫；福爾馬林固定后可見表面粗糙、顏色灰白等肝組織早期肝纖維化的表現(xiàn)。膽管再通后肝臟腫脹、淤血、水腫及早期肝纖維化均較前減輕。 3、HE染色結(jié)果 對照組術(shù)后隨時間進展肝臟損傷、纖維化程度變化不明顯。梗阻組術(shù)后隨時間的延長,肝細胞發(fā)生變性壞死程度加重,伴有大量中性粒細胞和淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤,部位從從膽管梗阻處逐漸轉(zhuǎn)向肝門,從匯管區(qū)擴展至肝小葉甚至整個肝葉結(jié)構(gòu)破壞；此過程也伴隨了新的膽管增生。梗通組1-7天及7-8天與梗阻組變化一致,隨時間進展肝損傷及纖維化程度逐漸加重。再通3天以后,肝細胞變性壞死較前減輕,肝小葉壞死范圍變小,肝門區(qū)膽管增生放緩,纖維細胞減少。 4、免疫組化結(jié)果 對照組分別與其它兩實驗組有明顯差異。兩實驗組在梗阻手術(shù)7天后有統(tǒng)計學(xué)差異。Ptchl免疫組化陽性染色的細胞數(shù)目及分布范圍隨著梗阻時間的延長而增加,在3-7天增長最快。Ptchl陽性細胞表達部位主要位于新匯管區(qū)膽管及肝間質(zhì)新增生膽管及無管腔的小膽管細胞胞漿中。 5、PCR結(jié)果 對照組目的基因表達較弱,梗阻組和梗通組表達較強。對照組變化不明顯。對不同組相同時間點的研究發(fā)現(xiàn)：兩實驗組中Ptch1、Gli2在8-14天,TGF-β1指標(biāo)在10-14天的差異有統(tǒng)計學(xué)意義；除了Gli2組的1-3天外,兩實驗組與對照組之間在各個時間點都有統(tǒng)計學(xué)意義。對相同組不同時間點的表達統(tǒng)計顯示：兩實驗組中TGF-β1在1-3天、Ptchl及Gli2在3-7天的增長有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 四、結(jié)論 1、研究發(fā)現(xiàn)大鼠梗阻性黃疸模型出現(xiàn)肝臟損傷、炎癥反應(yīng)、膽管上皮細胞實質(zhì)化、纖維化等過程。Hh信號通路參與膽管梗阻后損傷的修復(fù)過程,其時序性變化趨勢與肝臟損傷修復(fù)的肝功能及病理變化、免疫組化變化相一致,與之具有相關(guān)性。 2、研究發(fā)現(xiàn)兩處理組目的基因比探查組表達較強。在兩處理組中,1-7天時,隨著結(jié)扎天數(shù)的增加表達量逐漸增強,探查組無明顯變化。其中Ptch1、Gli2與損傷修復(fù)的病理變化、炎癥反應(yīng)及纖維化的進程相一致,TGF-β1與促進肝臟纖維化過程有關(guān)。 3、研究發(fā)現(xiàn)在損傷修復(fù)過程中的3-7天是纖維化過程的特殊時期,第3天之前以肝損害加重、促纖維化過程為主,第3-7天恰好相反,第7天之后為持續(xù)緩慢的損傷及肝臟纖維化進程。對于梗通組來說,從梗阻7天到再通1天肝臟的損傷繼續(xù)加重,再通1天時損傷達到一個小高峰,之后損傷修復(fù)占主導(dǎo)地位,出現(xiàn)抗纖維化、上皮細胞實質(zhì)化。
【關(guān)鍵詞】：Hedgehog信號通路 膽管梗阻再通 肝臟修復(fù) 上皮細胞實質(zhì)化轉(zhuǎn)化 肝纖維化 生長因子β1 跨膜受體1 下游調(diào)控因子2
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R657.43
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-15
• 研究現(xiàn)狀、成果13-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、大鼠梗阻性黃疸再通模型造模及炎癥、損傷時序性變化15-24
• 1.1 對象和方法15-18
• 1.1.1 實驗動物、儀器設(shè)備15
• 1.1.2 實驗動物分組、模型建立及取材15-17
• 1.1.3 統(tǒng)計學(xué)處理17-18
• 1.2 結(jié)果18-21
• 1.3 討論21-22
• 1.3.1 梗阻性黃疸再通模型造模方法的選擇21
• 1.3.2 大鼠梗阻再通過程中炎癥、損傷等的時序變化21-22
• 1.4 小結(jié)22-24
• 二、大鼠梗阻性黃疸再通模型肝臟大體變化及組織化學(xué)研究24-34
• 2.1 對象和方法24-25
• 2.1.1 實驗動物、儀器和試劑24
• 2.1.2 實驗動物分組、模型建立及取材24
• 2.1.3 實驗方法24-25
• 2.1.4 統(tǒng)計學(xué)處理25
• 2.2 結(jié)果25-26
• 2.2.1 大體結(jié)果25-26
• 2.2.2 HE染色結(jié)果26
• 2.2.3 免疫組化結(jié)果26
• 2.3 討論26-29
• 2.4 小結(jié)29-34
• 三、大鼠梗阻性黃疸再通模型中Hedgehog信號通路的時序性變化34-47
• 3.1 對象和方法34-37
• 3.1.1 實驗動物、儀器和試劑34
• 3.1.2 實驗動物分組、模型建立及取材34
• 3.1.3 觀察指標(biāo)及方法34-36
• 3.1.4 統(tǒng)計學(xué)處理36-37
• 3.2 結(jié)果37-40
• 3.3 討論40-46
• 3.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述53-68
• 綜述參考文獻62-68
• 致謝68

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：Hedgehog信號通路在大鼠膽管梗阻再通模型中的表達及意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：388539