本文關(guān)鍵詞：3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程與磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)水平的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 比較正常人和肥胖患者的血清磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Phospholipid transfer protein, PLTP）活性，初步了解PLTP與肥胖（Obesity）的關(guān)系。研究體外培養(yǎng)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（3T3-L1前脂肪細(xì)胞）在誘導(dǎo)分化過程中PLTP基因表達(dá)的變化，探究其與前脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)聚集之間的關(guān)系，進(jìn)一步闡述PLTP對(duì)肥胖和動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis, AS）的影響，為治療肥胖和動(dòng)脈粥樣硬化提供新的途徑。 方法 1.檢測(cè)正常人和肥胖患者血清PLTP活性：選取50-60歲正常人（18.5≤體重指數(shù)（Body Mass Index, BMI）25）和肥胖患者（30≤BMI）各11例，抽血離心后取血清，用人磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清中PLTP活性，研究正常人和肥胖患者血清PLTP活性有何區(qū)別。 2.培養(yǎng)及誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞：用增殖培養(yǎng)基體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞，接種六孔板待長滿后繼續(xù)用增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)2-3天，之后聯(lián)合應(yīng)用1-甲基-3-異丁基黃嘌呤(1-methyl-3-isobutyl xan, IBMX)、地塞米松（Dexamethasone）、胰島素(Insulin)2天誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化，在以后誘導(dǎo)過程中用胰島素維持培養(yǎng)。 3.誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色：分別取誘導(dǎo)第0、2、4、8、11、14天細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化及脂質(zhì)聚集情況。 4.檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中PLTP mRNA的變化：分別取誘導(dǎo)第0、2、4、6、9、12天細(xì)胞提取總RNA，通過熒光定量PCR檢測(cè)PLTP mRNA的表達(dá)變化。 5.檢測(cè)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中PLTP蛋白的變化：分別取誘導(dǎo)第0、2、4、6、9、12天細(xì)胞提取總蛋白，western blot檢測(cè)PLTP蛋白的變化。 結(jié)果 1.檢測(cè)50-60歲正常人和肥胖患者血清得出肥胖患者血清PLTP活性較正常人高，約為正常人的2倍，為后續(xù)探究PLTP隨3T3-前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化而變化奠定理論基礎(chǔ)。 2.3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色，肉眼可見培養(yǎng)皿底隨誘導(dǎo)天數(shù)增加染色顏色加深。倒置顯微鏡下，隨誘導(dǎo)天數(shù)增加，，細(xì)胞體積增大變圓，第11天及以后含有紅色脂滴的成熟脂肪細(xì)胞在視野中占90%以上。 3. PLTP mRNA的變化：隨著3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的成熟，PLTP mRNA表達(dá)量逐漸增加，第2、4天PLTP mRNA表達(dá)量增加不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。分化至第6、9、12天明顯增高，分別比誘導(dǎo)第0天增加3.3倍（P0.01）、3.7倍（P0.01）和5倍（P0.01）。 4. PLTP蛋白的變化：通過western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以看出在誘導(dǎo)分化不同階段，PLTP蛋白表達(dá)水平與mRNA表達(dá)基本一致，在誘導(dǎo)第2、4天，PLTP蛋白表達(dá)量變化不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。在誘導(dǎo)第6、9、12天達(dá)到較高水平，較誘導(dǎo)第0天分別增加3.2倍（P0.05）、4.1倍（P0.01）和3.4倍（P0.05）。 結(jié)論 1.肥胖患者比正常人血清PLTP活性高，說明PLTP和肥胖成正相關(guān)。 2.隨著3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)天數(shù)增加，前細(xì)胞逐漸分化為成熟脂肪細(xì)胞，在第11天誘導(dǎo)率達(dá)到最高水平，以后隨天數(shù)增加成熟脂肪細(xì)胞不再增加。PLTP的mRNA水平與細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量同步增加。 3. PLTP蛋白水平隨3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)天數(shù)增加而增多，說明PLTP的蛋白含量與細(xì)胞成熟同步，提示PLTP有可能參與甚至調(diào)節(jié)成熟過程。
【關(guān)鍵詞】：磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 3T3-L1前脂肪細(xì)胞 脂肪細(xì)胞分化 脂質(zhì)聚集
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符號(hào)說明9-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 附圖40-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58
• 攻讀碩士學(xué)位期間參與的課題研究58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 秦樹存;葉平;;磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的生物學(xué)特性及其與脂蛋白代謝相關(guān)疾病的關(guān)系[J];中華老年心腦血管病雜志;2008年08期

2 黃俊軍,周新;磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究[J];生命的化學(xué);1999年02期

3 焦誼;王延蛟;李俊紅;周眾;韓春晨;孫麗麗;連政;張成;關(guān)亞群;;3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中chemerin基因表達(dá)水平的變化[J];中國老年學(xué)雜志;2011年21期

  本文關(guān)鍵詞：3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程與磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)水平的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：388284