本文關(guān)鍵詞：人類大腦基底節(jié)鈣化致病基因SLC20A2果蠅研究模型的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：特發(fā)性基底節(jié)鈣化(IBGC)是人類的一種先天性神經(jīng)系統(tǒng)疾病,又稱Fahr病�；颊叩幕坠�(jié)和其它大腦區(qū)域呈現(xiàn)對稱性鈣化。目前,國際合作研究團隊已經(jīng)成功發(fā)現(xiàn)并克隆了IBGC的第一個致病基因SLC20A2,該基因編碼一種跨膜蛋白PiT2,與無機磷的跨膜轉(zhuǎn)運有關(guān)。 果蠅基因CG42575(dSLC20A2)是人類特發(fā)性基底節(jié)鈣化致病基因SLC20A2的同源基因。dSLC20A2位于果蠅的第三號染色體上,全長約11kb,編碼一種由667個氨基酸組成的鈉離子依賴型磷酸鹽跨膜轉(zhuǎn)運蛋白。該蛋白與人類基因SLC20A2編碼的PiT2蛋白的一致性達到了42%。 我們以果蠅基因dSLC20A2為研究對象,通過構(gòu)建一系列的轉(zhuǎn)基因果蠅工具株,包括定點突變果蠅、部分缺失突變體、無功能的突變體和帶有GFP標簽的高表達果蠅等,希望能夠為人類SLC20A2基因致病機理的研究提供參考。 我們已經(jīng)利用定點突變技術(shù)和顯微注射的方法獲得了4種與人類IBGC患者具有相同位點錯義突變的果蠅疾病模型。我們通過高表達帶有GFP標簽的轉(zhuǎn)基因果蠅發(fā)現(xiàn)dSLC20A2可以定位于果蠅三齡幼蟲的大腦及神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscular junction, NMJ)。另外,我們還發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)系統(tǒng)高表達dSLC20A2-S588W可以導致果蠅三齡幼蟲神經(jīng)突觸發(fā)育異常。 該IBGC的果蠅研究模型的建立將為解析dSLC20A2基因的功能特別是在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能提供重要的研究工具。
【關(guān)鍵詞】：特發(fā)性基底節(jié)鈣化 SLC20A2 CG44575 果蠅模型
【學位授予單位】：湖北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743;R-332
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 目錄7-9
• 第一章 緒論9-19
• 1.1 模式生物果蠅9-16
• 1.1.1 果蠅作為模式生物的優(yōu)勢10-12
• 1.1.2 果蠅的應用12-14
• 1.1.3 Gal4/UAS組織特異性表達系統(tǒng)簡介14-15
• 1.1.4 基于P因子的果蠅轉(zhuǎn)基因技術(shù)15-16
• 1.2 研究背景及目的16-19
• 1.2.1 IBGC疾病簡介16-17
• 1.2.2 研究目的17-19
• 第二章 材料與方法19-39
• 2.1 實驗材料19-20
• 2.1.1 果蠅品系19
• 2.1.2 主要儀器19
• 2.1.3 主要試劑19-20
• 2.1.4 實驗所用抗體20
• 2.2 果蠅的遺傳學操作20-21
• 2.2.1 果蠅基礎培養(yǎng)基的配制方法20
• 2.2.2 雌雄果蠅的鑒別20-21
• 2.2.3 處女蠅的挑選方法21
• 2.3 UAS-dSLC20A2高表達轉(zhuǎn)基因果蠅的構(gòu)建21-27
• 2.3.1 重組質(zhì)粒UAS-dSLC20A2的構(gòu)建22-25
• 2.3.2 顯微注射25-26
• 2.3.3 轉(zhuǎn)基因果蠅的定位及平衡26-27
• 2.4 點突變果蠅工具的構(gòu)建27-30
• 2.4.1 點突變重組質(zhì)粒的構(gòu)建28-30
• 2.4.2 顯微注射以及篩選定位30
• 2.5 UAS-dSLC20A2-GFP轉(zhuǎn)基因果蠅的構(gòu)建30-32
• 2.5.1 UAS-dSLC20A2-GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建30-31
• 2.5.2 顯微注射以及篩選定位31-32
• 2.6 缺失突變果蠅工具株的構(gòu)建32-36
• 2.6.1 Ends-out法獲取缺失突變果蠅32-35
• 2.6.2 利用P因子非精確跳出獲取缺失突變果蠅35-36
• 2.7 果蠅三齡幼蟲的解剖與免疫染色36-38
• 2.7.1 三齡幼蟲的解剖36-37
• 2.7.2 免疫染色37-38
• 2.7.3 圖片采集38
• 2.8 Anti-dSLC20A2多克隆抗體的制備38-39
• 第三章 實驗結(jié)果39-47
• 3.1 果蠅與人類SLC20A2的同源基因是CG4257539-40
• 3.2 dSLC20A2高表達轉(zhuǎn)基因果蠅的獲得40-42
• 3.3 dSLC20A2的S588W位點突變造成果蠅大腦神經(jīng)突觸發(fā)育異常42-43
• 3.4 帶有GFP標簽的dSLC20A2高表達轉(zhuǎn)基因果蠅的獲得43-44
• 3.5 dSLC20A2在果蠅體內(nèi)的定位44-46
• 3.5.1 dSLC20A2定位于果蠅大腦神經(jīng)細胞膜上44-45
• 3.5.2 dSLC20A2定位于神經(jīng)肌肉接頭處45-46
• 3.6 缺失突變果蠅46-47
• 第四章 結(jié)論及討論47-50
• 4.1 結(jié)論47-48
• 4.2 討論48-50
• 參考文獻50-54
• 致謝54

【參考文獻】

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳越;利用GAL4/UAS系統(tǒng)篩選人類功能基因及Ras在果蠅眼中抑制細胞凋亡的機制[D];復旦大學;2006年

  本文關(guān)鍵詞：人類大腦基底節(jié)鈣化致病基因SLC20A2果蠅研究模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：388233