本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對炎癥性腸病模型鼠緊密連接蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]：探討沙利度胺對三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)炎癥性腸病模型鼠腸粘膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin、claudin-1及zo-1表達(dá)的調(diào)控,進(jìn)一步闡明沙利度胺對炎癥性腸病模型鼠腸粘膜屏障的保護(hù)作用。[方法]：選擇4-5周齡SD大鼠分為正常組(24只)、模型組(28只)、沙利度胺治療組(28只),模型組及治療組使用TNBS誘導(dǎo)炎癥性腸病鼠模型。各組在觀察中第7天、10天各組處死8-12只大鼠,留取血液標(biāo)本及腸道標(biāo)本。分別進(jìn)行(1)HE染色、電鏡觀察,及大體評分、組織學(xué)損傷評分；(2)使用ELISA方法測定血TNF-a的水平；(3)使用western blot方法觀察occludin、claudin-1蛋白水平變化；(4)使用免疫組化方法觀察zo-1的表達(dá)水平變化及定位；(5)使用熒光定量PCR的方法觀察occludin、claudin-1、zo-1的mRNA水平變化。[結(jié)果]：1.一般情況及大體評分造模后大鼠出現(xiàn)便血、稀便、腹脹等消化道癥狀及活動減少等全身癥狀,解剖時腸道粘連較嚴(yán)重,腸道大體評分升高。沙利度胺治療組大鼠較模型組腹瀉、腹脹減輕,全身癥狀好轉(zhuǎn)。解剖腸道時腸道粘連不明顯,大體評分降低。2.HE染色、組織學(xué)評分及電鏡觀察TNBS誘導(dǎo)炎癥性腸病鼠造模后,模型組較正常組組織學(xué)評分增高；沙利度胺治療(150mg/kg)后較模型組,組織學(xué)評分降低,在第10天時兩者之間的評分差異具統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.0273)。電鏡觀察下第7天及第10天時,模型組緊密連接結(jié)構(gòu)不清晰,長度縮短,橋粒結(jié)構(gòu)減少；沙利度胺治療組緊密連接較模型組結(jié)構(gòu)清晰,長度增長,橋粒結(jié)構(gòu)豐富。3.血TNF-α因子水平ELISA測定血液中TNF-α因子水平,較之正常組,第7天時模型組TNF-α水平明顯升高(p=0.0268)；而經(jīng)沙利度胺治療后,ELISA測定治療組血液中TNF-α水平較正常組仍高(p=0.0304)。ELISA測定血液中第10天時,模型組TNF-α水平明顯升高(p=0.0078)；而經(jīng)沙利度胺治療后,ELISA測定治療組血液中TNF-α水平較正常組稍高(p=0.0131)。第10天較第7天,模型組TNF-α水平升高,而沙利度胺治療組降低,模型組與沙利度胺治療組兩組之間差別尚無統(tǒng)計學(xué)意義。4.腸道粘膜組織中occludin、claudin-1、zo-1蛋白水平的調(diào)節(jié)(1)非磷酸化occludin:治療第7天,非磷酸化occludin在模型組(p0.001)及沙利度胺組(p=0.023)較其在正常組明顯增多且有統(tǒng)計學(xué)意義,且模型組較沙利度胺治療組非磷酸化occludin蛋白顯著增多且有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.023)。治療第10天,模型組及沙利度胺組較正常組,非磷酸化occludin蛋白增多但無統(tǒng)計學(xué)意義,且兩組之間無明顯差別。治療第10天與治療第7天相比,模型組非磷酸化occludin蛋白明顯減少且有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.017)。沙利度胺組非磷酸化occludin蛋白水平無明顯變化。(2) claudin-1治療第7天,模型組較正常組claudin-1蛋白減少且有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.004),沙利度胺組較正常組減少,但無統(tǒng)計學(xué)意義p=0.050)。模型組較沙利度胺組claudin-1蛋白減少但無統(tǒng)計學(xué)意義。治療第10天,模型組較正常組claudin-1蛋白減少且有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.006),沙利度胺組較正常組減少但無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組較沙利度胺組claudin-1蛋白減少且有統(tǒng)計學(xué)意義p=0.024)。治療第10天與治療第7天相比,模型組claudin-1蛋白量減少但無統(tǒng)計學(xué)意義,沙利度胺組claudin-1蛋白增加,但無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.204)。(3)zo-1：免疫組化測定第7天,模型組較沙利度胺組(p=0.72)、正常組(p=0.31)增加但無統(tǒng)計學(xué)意義,沙利度胺組較正常組增加無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.546)。治療第10天,模型組較沙利度胺組p=0.426)、正常組(p=0.0503)增加但無統(tǒng)計學(xué)意義,沙利度胺組較正常組增加但無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.212)。zo-1定位在正常組中主要分布在細(xì)胞之間頂端細(xì)胞膜處,而模型組及沙利度胺組分布在細(xì)胞質(zhì)中,沙利度胺較模型組好轉(zhuǎn)。5.腸道粘膜組織中occludin、claudin-1、zo-1轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)(1) occludin mRNA水平在第7天時模型組最高,較沙利度胺組(p=0.0006)及正常組(p=0.0074)明顯升高；沙利度胺組較正常組降低,但無統(tǒng)計學(xué)意義。第10天時,模型組及沙利度胺組趨向于正常。(2) claudin-1 mRNA水平在第7天時模型組最低,較沙利度胺組(p=0.4926)及正常組(p=0.0033)降低；沙利度胺組較正常組明顯降低(p=0.0375)。第10天時,模型組(p=0.019)及沙利度胺組(p=0.65)較正常組降低；沙利度胺組較模型組升高(p=0.0171)。(3) zo-1 mRNA水平在第7天時模型組最高,較沙利度胺組(p=0.049)及正常組(p=0.0414)升高；第10天時,模型組(p=0.0016)及沙利度胺組(p=0.0073)較正常組明顯增高。沙利度胺組第10天較第7天時zo-1mRNA表達(dá)水平增高(p=0.0348)。[結(jié)論]:TNBS造�？梢砸鹉Ｐ徒M大鼠血TNF-α水平升高,粘膜及粘膜下嚴(yán)重炎癥浸潤,上皮細(xì)胞排列及緊密連接結(jié)構(gòu)遭到破壞。蛋白方面,非磷酸化occludin水平升高、claudin-1蛋白水平降低、zo-1水平升高、zo-1的分布向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)移；mRNA方面,occludin、zo-1受炎癥因子刺激表達(dá)增加,而claudin-1表達(dá)降低。沙利度胺治療后可以顯著降低血TNF-a水平,減輕炎癥浸潤,改善上皮細(xì)胞排列和腸道緊密連接,治療組較之模型組,蛋白方面,occludin的非磷酸化程度減少,同時claudin-1蛋白水平較高、zo-1水平較低,zo-1相對更集中地分布于細(xì)胞膜處；mRNA方面,occludin、zo-1表達(dá)升高的程度及claudin-1表達(dá)降低的程度均有所緩解。
【關(guān)鍵詞】：沙利度胺 炎癥性腸病 緊密連接蛋白 occludin claudin-1 zo-1
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R725.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 造模及標(biāo)本的留取、大體評分13-15
• 一、材料和方法13-14
• 二、結(jié)果14-15
• HE染色、組織學(xué)評分及電鏡觀察15-20
• 一、材料和方法15-16
• 二、結(jié)果16-20
• ELISA方法測定血TNF-α因子水平20-22
• 一、材料和方法20-21
• 二、結(jié)果21-22
• Western blot及免疫組化測定occludin、claiidin-1、ZO-1蛋白的表達(dá)及定位22-31
• 一、Western blot材料及方法22-24
• 二、免疫組化材料及方法24-25
• 三、Western blot結(jié)果及免疫組化結(jié)果25-29
• 四、TNF-α濃度與非磷酸化occludin、claudin-1蛋白水平的關(guān)系29-31
• 熒光定量PCR測定occludin、claudin-1、Zo-1蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平31-36
• 一、材料與方法31-33
• 二、結(jié)果33-36
• 討論36-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57

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本文編號：388056