本文關鍵詞：單核細胞趨化因子及受體在大鼠椎間盤突出疼痛模型中的作用及機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究椎間盤突出誘導的神經病理性疼痛模型中單核細胞趨化因子CCL2及其受體CCR2在大鼠背根神經節(jié)(DRG)和脊髓中的表達變化和細胞分布,探討它們在慢性神經病理性疼痛中的調制作用。方法將大鼠尾椎的自體髓核移植到左側L5神經根近背根神經節(jié)的位置,制備成腰椎間盤突出大鼠模型。測量LDH手術后各時間點術側后爪的機械痛和熱痛覺過敏。取大鼠手術側背根神經節(jié)(DRG)和脊髓腰膨大L3-5段,通過實時熒光定量PCR檢測CCL2/CCR2和TNF-αmRNA表達變化,用免疫熒光染色方法檢測ATF3,ED-1,CCL2,CCR2的蛋白表達變化。免疫熒光雙標檢測CCL2和CCR2在DRG和脊髓中表達的細胞類型。Western Blot方法檢測GFAP蛋白表達變化。鞘內注射CCR2拮抗劑RS504393和TNF-α拮抗劑Etanercept,檢測其對疼痛行為的影響。結果(1)自體髓核移植(NP)誘導產生快速的機械觸誘發(fā)痛和延遲的熱痛覺過敏。術側爪的機械痛縮爪閾值(PWT)在術后1d即開始下降,峰值持續(xù)至少14d,28d時有小幅恢復;熱刺激的縮爪潛伏期在術后5d開始下降,維持到21d,在28d完全恢復。(2)NP誘導DRG神經元損傷和巨噬細胞遷移。(3)NP誘導DRG中CCL2 mRNA和蛋白表達上調:mRNA的上調從3d開始,維持21d以上;蛋白上調在術后5d和10d有顯著性;免疫熒光雙標顯示CCL2與CGRP,IB4和NF200共標。(4)NP誘導DRG中CCL2的主要受體CCR2表達升高:CCR2的mRNA在NP后1d即開始升高,10d達到頂峰一直到21d都維持在較高水平;免疫熒光染色顯示蛋白上調在術后5d和10d有顯著性;雙標結果顯示CCR2與MAP2和ED-1共標,但與GFAP不共標。(5)NP誘導脊髓中CCL2mRNA和蛋白表達上調:CCL2的mRNA表達增加從1d持續(xù)到21d;NP植入后在5d,10d和21d CCL2-IR增加;雙標顯示CCL2主要表達在GFAP-陽性的星形膠質細胞中,而不在NeuN-陽性的神經元或OX-42-陽性的小膠質細胞中;Western Blot顯示脊髓中GFAP的表達從1d開始增加持續(xù)到至少7d;免疫熒光染色進一步證明在術后10d NP組GFAP染色強于假手術組。(6)NP誘導脊髓中CCR2 mRNA和蛋白表達上調:術后3d,5d和10d CCR2 mRNA上調,但是1d和21d沒有變化;免疫熒光染色進一步證明了CCR2蛋白表達在5d和10d顯著升高;雙標顯示CCR2-IR與神經元的標記物NeuN共標。(7)在術后3天或10天鞘內注射CCR2的拮抗劑RS504393顯著減弱了NP誘導的機械觸誘發(fā)痛。(8)NP誘導DRG和脊髓中TNF-αmRNA的顯著升高;在NP之前鞘內注射TNF-α的抑制劑依納西普延遲了機械觸痛覺過敏并且降低了CCL2和CCR2 mRNA表達。結論DRG和脊髓中CCL2/CCR2信號通過介導不同細胞間的相互作用參與LDH誘導的疼痛。TNF-α拮抗劑和CCR2拮抗劑分別在椎間盤突出的形成期和維持期發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
【關鍵詞】：單核細胞趨化因子 CCR2 腫瘤壞死因子α 腰椎間盤突出 髓核
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R681.53;R-332

  本文關鍵詞：單核細胞趨化因子及受體在大鼠椎間盤突出疼痛模型中的作用及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：385988