本文關(guān)鍵詞：單核細(xì)胞趨化因子及受體在大鼠椎間盤突出疼痛模型中的作用及機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究椎間盤突出誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛模型中單核細(xì)胞趨化因子CCL2及其受體CCR2在大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)和脊髓中的表達(dá)變化和細(xì)胞分布,探討它們在慢性神經(jīng)病理性疼痛中的調(diào)制作用。方法將大鼠尾椎的自體髓核移植到左側(cè)L5神經(jīng)根近背根神經(jīng)節(jié)的位置,制備成腰椎間盤突出大鼠模型。測量LDH手術(shù)后各時間點(diǎn)術(shù)側(cè)后爪的機(jī)械痛和熱痛覺過敏。取大鼠手術(shù)側(cè)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)和脊髓腰膨大L3-5段,通過實(shí)時熒光定量PCR檢測CCL2/CCR2和TNF-αmRNA表達(dá)變化,用免疫熒光染色方法檢測ATF3,ED-1,CCL2,CCR2的蛋白表達(dá)變化。免疫熒光雙標(biāo)檢測CCL2和CCR2在DRG和脊髓中表達(dá)的細(xì)胞類型。Western Blot方法檢測GFAP蛋白表達(dá)變化。鞘內(nèi)注射CCR2拮抗劑RS504393和TNF-α拮抗劑Etanercept,檢測其對疼痛行為的影響。結(jié)果(1)自體髓核移植(NP)誘導(dǎo)產(chǎn)生快速的機(jī)械觸誘發(fā)痛和延遲的熱痛覺過敏。術(shù)側(cè)爪的機(jī)械痛縮爪閾值(PWT)在術(shù)后1d即開始下降,峰值持續(xù)至少14d,28d時有小幅恢復(fù);熱刺激的縮爪潛伏期在術(shù)后5d開始下降,維持到21d,在28d完全恢復(fù)。(2)NP誘導(dǎo)DRG神經(jīng)元損傷和巨噬細(xì)胞遷移。(3)NP誘導(dǎo)DRG中CCL2 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào):mRNA的上調(diào)從3d開始,維持21d以上;蛋白上調(diào)在術(shù)后5d和10d有顯著性;免疫熒光雙標(biāo)顯示CCL2與CGRP,IB4和NF200共標(biāo)。(4)NP誘導(dǎo)DRG中CCL2的主要受體CCR2表達(dá)升高:CCR2的mRNA在NP后1d即開始升高,10d達(dá)到頂峰一直到21d都維持在較高水平;免疫熒光染色顯示蛋白上調(diào)在術(shù)后5d和10d有顯著性;雙標(biāo)結(jié)果顯示CCR2與MAP2和ED-1共標(biāo),但與GFAP不共標(biāo)。(5)NP誘導(dǎo)脊髓中CCL2mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào):CCL2的mRNA表達(dá)增加從1d持續(xù)到21d;NP植入后在5d,10d和21d CCL2-IR增加;雙標(biāo)顯示CCL2主要表達(dá)在GFAP-陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞中,而不在NeuN-陽性的神經(jīng)元或OX-42-陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞中;Western Blot顯示脊髓中GFAP的表達(dá)從1d開始增加持續(xù)到至少7d;免疫熒光染色進(jìn)一步證明在術(shù)后10d NP組GFAP染色強(qiáng)于假手術(shù)組。(6)NP誘導(dǎo)脊髓中CCR2 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào):術(shù)后3d,5d和10d CCR2 mRNA上調(diào),但是1d和21d沒有變化;免疫熒光染色進(jìn)一步證明了CCR2蛋白表達(dá)在5d和10d顯著升高;雙標(biāo)顯示CCR2-IR與神經(jīng)元的標(biāo)記物NeuN共標(biāo)。(7)在術(shù)后3天或10天鞘內(nèi)注射CCR2的拮抗劑RS504393顯著減弱了NP誘導(dǎo)的機(jī)械觸誘發(fā)痛。(8)NP誘導(dǎo)DRG和脊髓中TNF-αmRNA的顯著升高;在NP之前鞘內(nèi)注射TNF-α的抑制劑依納西普延遲了機(jī)械觸痛覺過敏并且降低了CCL2和CCR2 mRNA表達(dá)。結(jié)論DRG和脊髓中CCL2/CCR2信號通過介導(dǎo)不同細(xì)胞間的相互作用參與LDH誘導(dǎo)的疼痛。TNF-α拮抗劑和CCR2拮抗劑分別在椎間盤突出的形成期和維持期發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
【關(guān)鍵詞】：單核細(xì)胞趨化因子 CCR2 腫瘤壞死因子α 腰椎間盤突出 髓核
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R681.53;R-332

  本文關(guān)鍵詞：單核細(xì)胞趨化因子及受體在大鼠椎間盤突出疼痛模型中的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：385988