本文關鍵詞：輪狀病毒乳鼠動物模型的建立與初步應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：A組輪狀病毒是導致嬰幼兒腹瀉的主要病原體,每年全球因輪狀病毒導致的死亡病例高達60萬。目前輪狀病毒感染沒有特效的治療藥物,現(xiàn)有的疫苗在不同的地區(qū)保護效果差距較大,價格昂貴且存在發(fā)生潛在感染的安全隱患,因此更加安全可靠、高效廉價疫苗的研發(fā)就成為當務之急。有效的動物模型是疫苗研發(fā)過程十分重要的環(huán)節(jié)和保障,也是研究病毒感染進程和致病機理的主要手段。本研究的目標在于建立穩(wěn)定的、可有效感染發(fā)病的輪狀病毒乳鼠動物模型,并控制可能影響評價的各種因素,分析優(yōu)化各項評價指標的使用；初步探索將模型用于保護性的評價,為進一步將該模型用于輪狀病毒疫苗的研制、抗體治療、抗病毒藥物篩選及致病機理等方面的研究奠定基礎。 本研究首先通過病毒培養(yǎng)、鑒定、濃縮和檢測,建立了穩(wěn)定均一的病毒庫。之后成功地構建了輪狀病毒乳鼠動物模型,通過灌胃攻毒7日齡的Balb/c乳鼠,可觀察到其體征和體重增長速度的變化,以及腹瀉、排毒、組織病變與病毒血癥等一系列癥狀。隨后利用建立的乳鼠動物模型在保護性評價上做了初步的運用。通過母傳抗體或者腹腔注射免疫血清的途徑,可將抗體有效地傳遞到乳鼠體內并發(fā)揮保護作用,有效保護乳鼠減弱腹瀉癥狀,縮短腹瀉與持續(xù)排毒過程,減輕組織病變和病毒的復制水平,這證實了該模型可以用于免疫保護性的評價。通過對乳鼠動物模型的各項評價指標進行影響因素、限制性與實用性的分析,進一步提高了對乳鼠動物模型的理解,有助于提高模型的穩(wěn)定性和保護性評估的準確性。 綜上所述,本研究成功構建了輪狀病毒乳鼠動物模型,將其在保護性的評價上進行了初步的應用。該模型的建立對于輪狀病毒疫苗的研發(fā)、抗體治療有效性評估以及病毒感染機理的研究具有重要的意義。
【關鍵詞】：輪狀病毒 乳鼠動物模型 保護性評價
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R-332
【目錄】：

• 摘要12-13
• Abstract13-14
• 縮略詞14-16
• 前言16-44
• 1. 輪狀病毒概況16-17
• 2. 輪狀病毒基因組、蛋白與結構17-23
• 2.1. 輪狀病毒基因組17
• 2.2. 輪狀病毒蛋白與結構17-23
• 3. 輪狀病毒分類與流行病學23-28
• 3.1. 輪狀病毒分類23-24
• 3.2. 輪狀病毒流行病學24-28
• 3.2.1. 輪狀病毒的季節(jié)性流行25-26
• 3.2.2. 輪狀病毒的地域性流行26-27
• 3.2.3. 輪狀病毒的流行趨勢27-28
• 4. 輪狀病毒感染與致病機制28-32
• 4.1. 輪狀病毒的傳染源與傳播途徑28-29
• 4.2. 輪狀病毒的生活史29-31
• 4.3. 輪狀病毒的致病機制31-32
• 5. 輪狀病毒的免疫保護機制32-34
• 5.1. 天然免疫33
• 5.2. 細胞免疫33
• 5.3. 體液免疫33-34
• 6. 輪狀病毒的檢測、治療與預防34-40
• 6.1. 輪狀病毒的檢測34-36
• 6.1.1. 經典檢測技術34
• 6.1.2. 免疫學檢測技術34-35
• 6.1.3. 基因檢測技術35-36
• 6.2. 輪狀病毒的預防與治療36-37
• 6.3. 輪狀病毒疫苗研究進展37-40
• 7. 輪狀病毒動物模型40-43
• 7.1. 輪狀病毒動物模型對輪狀病毒感染發(fā)病及其機理的研究41
• 7.2. 輪狀病毒動物模型對輪狀病毒毒力和種屬特異性的研究41-42
• 7.3. 輪狀病毒動物模型對免疫及相關保護性的研究42-43
• 8. 本研究的目的與意義43-44
• 材料與方法44-65
• 1. 材料44-48
• 1.1. 主要儀器44-45
• 1.2. 病毒、細胞及實驗動物45
• 1.2.1. 病毒45
• 1.2.2. 細胞45
• 1.2.3. 實驗動物45
• 1.3. 引物與探針45-46
• 1.4. 酶和單抗46
• 1.5. 試劑與耗材46
• 1.6. 培養(yǎng)基及常用溶液配制46-48
• 1.6.1. 細胞培養(yǎng)基的配置46
• 1.6.2. 細胞生物學實驗常用液的配置46-47
• 1.6.3. 免疫組化實驗和蘇木素·伊紅染色用液的配置47
• 1.6.4. ELISPOT實驗用液的配置47-48
• 1.6.5. EIA檢測試驗試劑48
• 2. 方法48-65
• 2.1. 常規(guī)細胞生物學實驗48-50
• 2.1.1. 細胞復蘇48
• 2.1.2. 細胞換液48-49
• 2.1.3. 細胞傳代49
• 2.1.4. 細胞凍存49
• 2.1.5. 細胞計數(shù)49-50
• 2.2. 病毒的培養(yǎng)和濃縮50-55
• 2.2.1. 輪狀病毒的培養(yǎng)50
• 2.2.2. 輪狀病毒的鑒定(RT-PCR法)50-53
• 2.2.3. 輪狀病毒感染滴度的檢測(酶聯(lián)免疫斑點法)53-54
• 2.2.4. 輪狀病毒的濃縮54
• 2.2.5. 輪狀病毒攻毒用病毒庫的建立54-55
• 2.3. 動物實驗方法55-57
• 2.3.1. 小鼠的皮下免疫55
• 2.3.2. 乳鼠的腹腔注射被動免疫55
• 2.3.3. 動物的分組與統(tǒng)計方法55-56
• 2.3.4. 乳鼠的灌胃攻毒56
• 2.3.5. 乳鼠攻毒后的監(jiān)測56-57
• 2.3.6. 乳鼠攻毒后的標本采集57
• 2.4. 動物標本的處理和檢測57-65
• 2.4.1. 標本中病毒的核酸定量檢測(Real-Time PCR)57-58
• 2.4.2. 組織病理制片方法58-60
• 2.4.3. 組化染色60-61
• 2.4.4. 免疫組織化學檢測61-62
• 2.4.5. 血清中和抗體水平的檢測62-63
• 2.4.6. ELISA檢測抗體水平63-64
• 2.4.7. ELISA檢測抗原含量64-65
• 結果與分析65-85
• 1. 輪狀病毒培養(yǎng)與滴度檢測65-67
• 1.1. 病毒培養(yǎng)與鑒定65-66
• 1.2. 攻毒用病毒庫的建立66-67
• 1.3. 小結67
• 2. 輪狀病毒乳鼠動物模型的建立67-77
• 2.1. 攻毒后乳鼠體征變化與體重變化67-68
• 2.2. 腹瀉情況與相關指標68-71
• 2.2.1. 乳鼠攻毒后的腹瀉情況68-69
• 2.2.2. LLR毒株毒力的評價69-70
• 2.2.3. 最大腹瀉日齡探索70-71
• 2.3. 排毒檢測與最大可感日齡71-72
• 2.4. 腸組織病變72-75
• 2.4.1. 腸組織形態(tài)變化72-74
• 2.4.2. 腸免疫組化觀察74-75
• 2.5. 腸道外感染探究75-77
• 2.5.1. 病毒血癥75
• 2.5.2. 其他臟器感染探究75-77
• 2.6. 小結77
• 3. 模型的初步應用77-85
• 3.1. 母傳抗體模型77-81
• 3.1.1. 抗體的傳遞78
• 3.1.2. 攻毒后的各評價指標分析78-81
• 3.2. 后天被動免疫模型81-84
• 3.2.1. 抗體的傳遞81-82
• 3.2.2. 攻毒及腹瀉監(jiān)測82-83
• 3.2.3. 模型的優(yōu)化83-84
• 3.3. 小結84-85
• 討論85-90
• 1. 糞便排毒檢測指標的局限性與應用85-86
• 2. 母傳抗體模型中評價指標的應用與影響因素86-87
• 2.1. 體征與體重變化指標86
• 2.2. 腹瀉評分指標86-87
• 2.3. H.E.染色及IHC評價指標87
• 2.4. 病毒血癥評價指標87
• 3. 母傳抗體模型的局限性與后天被動免疫模型的潛在優(yōu)勢87-89
• 4. 病毒的毒力與種屬特異性89-90
• 總結與展望90-91
• 參考文獻91-102
• 致謝102

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前3條

1 吳劍;段晨陽;劉夢穎;何海洋;;輪狀病毒致腹瀉機制的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2013年12期

2 王明圣,徐學富,吳愛麗,蔣安民;輪狀病毒腸炎患兒免疫球蛋白和T細胞亞群的動態(tài)變化及其臨床意義[J];中華微生物學和免疫學雜志;1998年01期

3 趙高偉;任曉峰;;輪狀病毒感染機制及防治的研究進展[J];世界華人消化雜志;2013年01期

  本文關鍵詞：輪狀病毒乳鼠動物模型的建立與初步應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：386039