本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型的建立與初步應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：A組輪狀病毒是導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉的主要病原體,每年全球因輪狀病毒導(dǎo)致的死亡病例高達(dá)60萬(wàn)。目前輪狀病毒感染沒(méi)有特效的治療藥物,現(xiàn)有的疫苗在不同的地區(qū)保護(hù)效果差距較大,價(jià)格昂貴且存在發(fā)生潛在感染的安全隱患,因此更加安全可靠、高效廉價(jià)疫苗的研發(fā)就成為當(dāng)務(wù)之急。有效的動(dòng)物模型是疫苗研發(fā)過(guò)程十分重要的環(huán)節(jié)和保障,也是研究病毒感染進(jìn)程和致病機(jī)理的主要手段。本研究的目標(biāo)在于建立穩(wěn)定的、可有效感染發(fā)病的輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型,并控制可能影響評(píng)價(jià)的各種因素,分析優(yōu)化各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)的使用；初步探索將模型用于保護(hù)性的評(píng)價(jià),為進(jìn)一步將該模型用于輪狀病毒疫苗的研制、抗體治療、抗病毒藥物篩選及致病機(jī)理等方面的研究奠定基礎(chǔ)。 本研究首先通過(guò)病毒培養(yǎng)、鑒定、濃縮和檢測(cè),建立了穩(wěn)定均一的病毒庫(kù)。之后成功地構(gòu)建了輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型,通過(guò)灌胃攻毒7日齡的Balb/c乳鼠,可觀察到其體征和體重增長(zhǎng)速度的變化,以及腹瀉、排毒、組織病變與病毒血癥等一系列癥狀。隨后利用建立的乳鼠動(dòng)物模型在保護(hù)性評(píng)價(jià)上做了初步的運(yùn)用。通過(guò)母?jìng)骺贵w或者腹腔注射免疫血清的途徑,可將抗體有效地傳遞到乳鼠體內(nèi)并發(fā)揮保護(hù)作用,有效保護(hù)乳鼠減弱腹瀉癥狀,縮短腹瀉與持續(xù)排毒過(guò)程,減輕組織病變和病毒的復(fù)制水平,這證實(shí)了該模型可以用于免疫保護(hù)性的評(píng)價(jià)。通過(guò)對(duì)乳鼠動(dòng)物模型的各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行影響因素、限制性與實(shí)用性的分析,進(jìn)一步提高了對(duì)乳鼠動(dòng)物模型的理解,有助于提高模型的穩(wěn)定性和保護(hù)性評(píng)估的準(zhǔn)確性。 綜上所述,本研究成功構(gòu)建了輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型,將其在保護(hù)性的評(píng)價(jià)上進(jìn)行了初步的應(yīng)用。該模型的建立對(duì)于輪狀病毒疫苗的研發(fā)、抗體治療有效性評(píng)估以及病毒感染機(jī)理的研究具有重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：輪狀病毒 乳鼠動(dòng)物模型 保護(hù)性評(píng)價(jià)
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332
【目錄】：

• 摘要12-13
• Abstract13-14
• 縮略詞14-16
• 前言16-44
• 1. 輪狀病毒概況16-17
• 2. 輪狀病毒基因組、蛋白與結(jié)構(gòu)17-23
• 2.1. 輪狀病毒基因組17
• 2.2. 輪狀病毒蛋白與結(jié)構(gòu)17-23
• 3. 輪狀病毒分類與流行病學(xué)23-28
• 3.1. 輪狀病毒分類23-24
• 3.2. 輪狀病毒流行病學(xué)24-28
• 3.2.1. 輪狀病毒的季節(jié)性流行25-26
• 3.2.2. 輪狀病毒的地域性流行26-27
• 3.2.3. 輪狀病毒的流行趨勢(shì)27-28
• 4. 輪狀病毒感染與致病機(jī)制28-32
• 4.1. 輪狀病毒的傳染源與傳播途徑28-29
• 4.2. 輪狀病毒的生活史29-31
• 4.3. 輪狀病毒的致病機(jī)制31-32
• 5. 輪狀病毒的免疫保護(hù)機(jī)制32-34
• 5.1. 天然免疫33
• 5.2. 細(xì)胞免疫33
• 5.3. 體液免疫33-34
• 6. 輪狀病毒的檢測(cè)、治療與預(yù)防34-40
• 6.1. 輪狀病毒的檢測(cè)34-36
• 6.1.1. 經(jīng)典檢測(cè)技術(shù)34
• 6.1.2. 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)34-35
• 6.1.3. 基因檢測(cè)技術(shù)35-36
• 6.2. 輪狀病毒的預(yù)防與治療36-37
• 6.3. 輪狀病毒疫苗研究進(jìn)展37-40
• 7. 輪狀病毒動(dòng)物模型40-43
• 7.1. 輪狀病毒動(dòng)物模型對(duì)輪狀病毒感染發(fā)病及其機(jī)理的研究41
• 7.2. 輪狀病毒動(dòng)物模型對(duì)輪狀病毒毒力和種屬特異性的研究41-42
• 7.3. 輪狀病毒動(dòng)物模型對(duì)免疫及相關(guān)保護(hù)性的研究42-43
• 8. 本研究的目的與意義43-44
• 材料與方法44-65
• 1. 材料44-48
• 1.1. 主要儀器44-45
• 1.2. 病毒、細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 1.2.1. 病毒45
• 1.2.2. 細(xì)胞45
• 1.2.3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物45
• 1.3. 引物與探針45-46
• 1.4. 酶和單抗46
• 1.5. 試劑與耗材46
• 1.6. 培養(yǎng)基及常用溶液配制46-48
• 1.6.1. 細(xì)胞培養(yǎng)基的配置46
• 1.6.2. 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用液的配置46-47
• 1.6.3. 免疫組化實(shí)驗(yàn)和蘇木素·伊紅染色用液的配置47
• 1.6.4. ELISPOT實(shí)驗(yàn)用液的配置47-48
• 1.6.5. EIA檢測(cè)試驗(yàn)試劑48
• 2. 方法48-65
• 2.1. 常規(guī)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)48-50
• 2.1.1. 細(xì)胞復(fù)蘇48
• 2.1.2. 細(xì)胞換液48-49
• 2.1.3. 細(xì)胞傳代49
• 2.1.4. 細(xì)胞凍存49
• 2.1.5. 細(xì)胞計(jì)數(shù)49-50
• 2.2. 病毒的培養(yǎng)和濃縮50-55
• 2.2.1. 輪狀病毒的培養(yǎng)50
• 2.2.2. 輪狀病毒的鑒定(RT-PCR法)50-53
• 2.2.3. 輪狀病毒感染滴度的檢測(cè)(酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法)53-54
• 2.2.4. 輪狀病毒的濃縮54
• 2.2.5. 輪狀病毒攻毒用病毒庫(kù)的建立54-55
• 2.3. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法55-57
• 2.3.1. 小鼠的皮下免疫55
• 2.3.2. 乳鼠的腹腔注射被動(dòng)免疫55
• 2.3.3. 動(dòng)物的分組與統(tǒng)計(jì)方法55-56
• 2.3.4. 乳鼠的灌胃攻毒56
• 2.3.5. 乳鼠攻毒后的監(jiān)測(cè)56-57
• 2.3.6. 乳鼠攻毒后的標(biāo)本采集57
• 2.4. 動(dòng)物標(biāo)本的處理和檢測(cè)57-65
• 2.4.1. 標(biāo)本中病毒的核酸定量檢測(cè)(Real-Time PCR)57-58
• 2.4.2. 組織病理制片方法58-60
• 2.4.3. 組化染色60-61
• 2.4.4. 免疫組織化學(xué)檢測(cè)61-62
• 2.4.5. 血清中和抗體水平的檢測(cè)62-63
• 2.4.6. ELISA檢測(cè)抗體水平63-64
• 2.4.7. ELISA檢測(cè)抗原含量64-65
• 結(jié)果與分析65-85
• 1. 輪狀病毒培養(yǎng)與滴度檢測(cè)65-67
• 1.1. 病毒培養(yǎng)與鑒定65-66
• 1.2. 攻毒用病毒庫(kù)的建立66-67
• 1.3. 小結(jié)67
• 2. 輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型的建立67-77
• 2.1. 攻毒后乳鼠體征變化與體重變化67-68
• 2.2. 腹瀉情況與相關(guān)指標(biāo)68-71
• 2.2.1. 乳鼠攻毒后的腹瀉情況68-69
• 2.2.2. LLR毒株毒力的評(píng)價(jià)69-70
• 2.2.3. 最大腹瀉日齡探索70-71
• 2.3. 排毒檢測(cè)與最大可感日齡71-72
• 2.4. 腸組織病變72-75
• 2.4.1. 腸組織形態(tài)變化72-74
• 2.4.2. 腸免疫組化觀察74-75
• 2.5. 腸道外感染探究75-77
• 2.5.1. 病毒血癥75
• 2.5.2. 其他臟器感染探究75-77
• 2.6. 小結(jié)77
• 3. 模型的初步應(yīng)用77-85
• 3.1. 母?jìng)骺贵w模型77-81
• 3.1.1. 抗體的傳遞78
• 3.1.2. 攻毒后的各評(píng)價(jià)指標(biāo)分析78-81
• 3.2. 后天被動(dòng)免疫模型81-84
• 3.2.1. 抗體的傳遞81-82
• 3.2.2. 攻毒及腹瀉監(jiān)測(cè)82-83
• 3.2.3. 模型的優(yōu)化83-84
• 3.3. 小結(jié)84-85
• 討論85-90
• 1. 糞便排毒檢測(cè)指標(biāo)的局限性與應(yīng)用85-86
• 2. 母?jìng)骺贵w模型中評(píng)價(jià)指標(biāo)的應(yīng)用與影響因素86-87
• 2.1. 體征與體重變化指標(biāo)86
• 2.2. 腹瀉評(píng)分指標(biāo)86-87
• 2.3. H.E.染色及IHC評(píng)價(jià)指標(biāo)87
• 2.4. 病毒血癥評(píng)價(jià)指標(biāo)87
• 3. 母?jìng)骺贵w模型的局限性與后天被動(dòng)免疫模型的潛在優(yōu)勢(shì)87-89
• 4. 病毒的毒力與種屬特異性89-90
• 總結(jié)與展望90-91
• 參考文獻(xiàn)91-102
• 致謝102

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 吳劍;段晨陽(yáng);劉夢(mèng)穎;何海洋;;輪狀病毒致腹瀉機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年12期

2 王明圣,徐學(xué)富,吳愛(ài)麗,蔣安民;輪狀病毒腸炎患兒免疫球蛋白和T細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化及其臨床意義[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1998年01期

3 趙高偉;任曉峰;;輪狀病毒感染機(jī)制及防治的研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2013年01期

  本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒乳鼠動(dòng)物模型的建立與初步應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：386039