本文關(guān)鍵詞：剪切應(yīng)力對(duì)種植于不同細(xì)胞外基質(zhì)的內(nèi)皮祖細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本文旨在探討不同細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)大鼠骨髓來(lái)源的晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物學(xué)特性的影響及種植于不同細(xì)胞外基質(zhì)的晚期EPCs對(duì)流體剪切應(yīng)力的反應(yīng)性。方法:1.密度梯度離心法分離大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,應(yīng)用M199完全培養(yǎng)基(含15%胎牛血清,10μg/L VEGF及5μg/L b FGF)進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。細(xì)胞接種前,培養(yǎng)板分別用纖維粘連蛋白(Fibronectin,Fn)、層粘連蛋白(Laminin,Ln)或鼠尾膠原(Collagen,Col)包被,分組為Fn組、Ln組及Col組。以傳至第三代的EPCs,即晚期EPCs為靶細(xì)胞,采用CCK-8法、劃痕實(shí)驗(yàn)、粘附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)及Matrigel基質(zhì)膠分別檢測(cè)其增殖、遷移、粘附及管狀結(jié)構(gòu)形成等功能指標(biāo);熒光定量RT-PCR檢測(cè)內(nèi)皮分化標(biāo)志基因v WF和CD31的表達(dá)。2.利用平板流室系統(tǒng)對(duì)種植于不同細(xì)胞外基質(zhì)的晚期EPCs施以12 dyne/cm2剪切應(yīng)力,免疫熒光染色觀測(cè)F-actin的排列情況;CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖;Boyden小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移;粘附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞粘附;熒光定量RT-PCR及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞分化;Matrigel膠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)管狀結(jié)構(gòu)形成。結(jié)果:1.靜止?fàn)顟B(tài)下,Fn組和Col組細(xì)胞增殖能力強(qiáng)于Ln組(P0.05);Fn組細(xì)胞粘附能力強(qiáng)于Col組和Ln組(P0.01);Fn組和Col組細(xì)胞遷移能力強(qiáng)于Ln組(P0.01);Fn組管腔樣結(jié)構(gòu)形成能力強(qiáng)于Col組及Ln組(P0.05);三組v WF和CD31基因表達(dá)無(wú)明顯差異。2.剪切應(yīng)力處理后,Ln組細(xì)胞增殖、遷移及血管能力能力均強(qiáng)于Fn組和Col組(P0.05)。靜止?fàn)顟B(tài)的EPCs,F-actin主要分布在細(xì)胞的周邊和細(xì)胞核周,排列沒(méi)有明顯的方向性。剪切應(yīng)力加載后,Fn組細(xì)胞骨架按照切應(yīng)力流動(dòng)的方向排列,肌絲較之靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)雜且亂,而Col組和Ln組在剪切應(yīng)力處理完后,F-actin肌絲明顯增粗,且應(yīng)力纖維沿剪切應(yīng)力方向排列整齊,Ln組F-actin聚集成束,應(yīng)力纖維較多。結(jié)論:EPCs的生物學(xué)特性受細(xì)胞外基質(zhì)的影響;種植于不同細(xì)胞外基質(zhì)的EPCs對(duì)剪切應(yīng)力的反應(yīng)性不同。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞外基質(zhì) 內(nèi)皮祖細(xì)胞 纖維粘連蛋白 層粘連蛋白 鼠尾膠原 剪切應(yīng)力
【學(xué)位授予單位】：濰坊醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 符號(hào)說(shuō)明8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-22
• 結(jié)果22-25
• 討論25-30
• 結(jié)論30-31
• 附圖表31-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 文獻(xiàn)綜述46-63
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 致謝63-64
• 攻讀學(xué)位期間撰寫(xiě)的論文64
• 附件64

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