本文關(guān)鍵詞：常見流感病毒分型基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流行性感冒(Influenza),是由流感病毒(Influenza virus)引起的的人畜共患呼吸道傳染病。近100年來，全球已經(jīng)出現(xiàn)了數(shù)次不同型別流感病毒大流行，給人類生命財產(chǎn)安全造成極大的威脅。1918年的西班牙流感（H1N1亞型），造成了4000-6000萬人死亡；1968年香港流感（H3N2亞型）奪取了約150萬人的生命；而甲型H1N1流感自2009年3月在墨西哥暴發(fā)后迅速在全球流行，成為國際上重大公共衛(wèi)生事件。近幾年不同型別流感病毒交替、混合流行已經(jīng)成為常態(tài)，正確判斷流感病毒型別，對流行病學(xué)調(diào)查和疫情防控起著至關(guān)重要的作用。 本研究采用多重逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增技術(shù)、基因芯片技術(shù)以及酪胺信號放大結(jié)合量子點(diǎn)標(biāo)記銀染增強(qiáng)的可視化顯色技術(shù)，選取人流感病毒基因組中NA基因、HA基因、M基因的編碼區(qū)為擴(kuò)增靶區(qū)域，設(shè)計(jì)亞型特異性引物和探針，使用帶有生物素標(biāo)記的引物對靶基因進(jìn)行多重逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)先固定在醛基玻片上的流感病毒亞型特異性探針進(jìn)行雜交反應(yīng)，，采用酪胺信號放大結(jié)合量子點(diǎn)標(biāo)記銀染增強(qiáng)技術(shù)顯色，使探針呈現(xiàn)肉眼可見的信號，通過結(jié)果分析，對常見的甲型流感病毒（包括甲型H1N1流感病毒，季節(jié)性H1N1流感病毒，季節(jié)性H3N2流感病毒），乙型流感病毒進(jìn)行分型檢測。最終篩選出了5對特異性引物和5條特異性探針，優(yōu)化了多重逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增體系、雜交反應(yīng)和可視化顯色條件，考察了基因芯片的檢測性能，檢測了18個甲型流感病毒（包括甲型H1N1流感病毒，季節(jié)性H1N1流感病毒，季節(jié)性H3N2流感病毒）和乙型流感病毒毒株，檢測結(jié)果均為相應(yīng)型別陽性，無交叉反應(yīng)，檢測10種其他常見呼吸道病毒，檢測結(jié)果均為陰性，顯示本方法特異性良好；應(yīng)用本方法對各型別流感病毒重復(fù)5次進(jìn)行檢測，檢測信號CV值均小于20%，重復(fù)性較好；通過與實(shí)時熒光定量PCR的比較實(shí)驗(yàn)確定了本方法對各型別流感病毒檢測靈敏度均可達(dá)到103PFU/mL；應(yīng)用本方法檢測1247例臨床樣本，與測序方法的檢測結(jié)果的總符合率為96.2%。本方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速和高通量等特點(diǎn)，可以作為流感的流行病學(xué)調(diào)查以及臨床診斷的一種新方法。
【關(guān)鍵詞】：流感病毒 基因分型 多重逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增 基因芯片
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.13;Q503
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文縮略詞6-9
• 第1章 緒論9-15
• 1.1 研究背景和意義9-10
• 1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展10-12
• 1.3 本研究來源及主要研究內(nèi)容12
• 1.4 本章小結(jié)12-15
• 第2章 論文總體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和流感分型引物探針的篩選驗(yàn)證15-25
• 2.1 本研究的基本設(shè)計(jì)思路15
• 2.2 流感分型引物的設(shè)計(jì)、篩選和驗(yàn)證15-18
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 2.3 流感分型探針的設(shè)計(jì)和篩選18-21
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)方法18-19
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-21
• 2.4 參考品制備21-23
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)方法21
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23
• 2.5 本章小結(jié)23-25
• 第3章 多重逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增 (multiplex RT-PCR) 體系的優(yōu)化25-33
• 3.1 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 3.1.1 反應(yīng)體系中引物比例的優(yōu)化25
• 3.1.2 反應(yīng)體系中引物濃度的優(yōu)化25-26
• 3.1.3 RT-PCR 反應(yīng)退火溫度的優(yōu)化26
• 3.1.4 基因芯片的可視化顯色方法初步建立26-28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-32
• 3.2.1 反應(yīng)體系中引物比例的優(yōu)化結(jié)果28-29
• 3.2.2 反應(yīng)體系中引物濃度的優(yōu)化結(jié)果29-30
• 3.2.3 RT-PCR 反應(yīng)退火溫度的優(yōu)化30-31
• 3.2.4 最終確定的 RT-PCR 反應(yīng)體系31-32
• 3.2.5 最終確定的 RT-PCR 反應(yīng)條件32
• 3.3 本章小結(jié)32-33
• 第4章 基因芯片雜交和可視化顯色系統(tǒng)的優(yōu)化研究33-38
• 4.1 基因芯片雜交液的選擇和優(yōu)化33-34
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)方法33
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-34
• 4.2 可視化顯色系統(tǒng)的優(yōu)化34-36
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-36
• 4.3 本章小結(jié)36-38
• 第5章 基因芯片性能考察以及臨床應(yīng)用研究38-49
• 5.1 檢測結(jié)果參考值（參考范圍）的確定38
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)方法38
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38
• 5.2 基因芯片特異性分析38-40
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 5.3 精密度分析40-41
• 5.3.1 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 5.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41
• 5.4 基因芯片靈敏度分析41-43
• 5.4.1 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 5.4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-43
• 5.5 臨床樣本檢測43-47
• 5.5.1 實(shí)驗(yàn)方法43-44
• 5.5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-47
• 5.6 本章小結(jié)47-49
• 結(jié)論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 附錄55-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63-65
• 致謝65

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒毅!512026,李永齡!512026,葉建洲,黃銳敏!512026,鄧俊興!512026,陳東橋!512026,胡國超!512026,黃輝!512026,葉蟠德!512026;韶關(guān)市發(fā)現(xiàn)禽(H9N2)流感病毒感染人的監(jiān)測報告[J];中華流行病學(xué)雜志;2000年04期

2 張捷,汪翠玲,鈕澤春,潘南勝,段凱,郜金榮;流感病毒在Vero細(xì)胞上的增殖[J];氨基酸和生物資源;2004年04期

3 ;2000多種流感病毒基因組測序完成[J];北京農(nóng)業(yè);2007年21期

4 ;1918年:流感席卷世界[J];世界博覽;2009年11期

5 王潛淵;流感病毒與流感流行[J];中國獸醫(yī)科技;1981年08期

6 郭元吉;流行性感冒病毒疫苗現(xiàn)狀[J];中國處方藥;2003年08期

7 杜寧;楊霄星;楊磊;曾玉紅;鄒淑梅;薄洪;郭元吉;李德新;舒躍龍;;1957年亞洲流感(H2N2)病原學(xué)概述[J];病毒學(xué)報;2009年S1期

8 ;流感帶給我們的警示和反思[J];百科知識;2009年12期

9 趙翠英，齊順祥，高惠敏，李性善;用狗腎細(xì)胞分離流感病毒出現(xiàn)細(xì)胞病變陽性血凝“陰性”的鑒定方法[J];河北醫(yī)藥;1996年02期

10 李紹靜;;冬防流感[J];科技致富向?qū)?1999年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 George F.Gao;;豬與人H1N1亞型流感病毒遺傳相關(guān)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 曹穎莉;楊森;李英霞;陳虹;郭穎;;應(yīng)用假病毒模型尋找H5N1高致病流感病毒侵入抑制劑[A];全國第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

3 李金楠;劉超;王麗君;郭宇;陳衛(wèi)強(qiáng);楊誠;饒子和;;H5N1流感病毒聚合酶的天然抑制劑研究[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第3分會場摘要集[C];2012年

4 晏文君;馬志永;;流感病毒RNPs核輸出機(jī)制研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 王玉娟;楊婧;王嘉榕;畢允晨;王俊峰;;西班牙流感病毒膜蛋白PB1-F2的溶液結(jié)構(gòu)研究[A];第十六屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

6 魯夢婷;孫莎莎;杜宏超;郭健;遲萬怡;施堯;林德貴;;H3N2亞型流感病毒犬的病例分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

7 侯韶毅;張民秀;盧桂娟;高永銳;劉芳;陸增榮;黃偉堅(jiān);;豬流感病毒分離及表面抗原基因序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

8 李葉;廖明;辛朝安;;A型流感病毒對小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 王廣美;叢彥龍;丁壯;常爽;張泉鵬;孫玉章;王曉莉;;類人豬H3N2流感病毒與禽H5流感重組——一個潛在的公共威脅[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 李琳;張陸明;張妼;曹健榮;;人工RNA假病毒技術(shù)在甲型H1N1流感病毒(2009)RNA檢測試劑盒中的應(yīng)用研究[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 特約記者吳志軍 通訊員郝成濤;病毒檢測試劑形成配套體系[N];健康報;2009年

2 ;健康習(xí)慣比疫苗更能抵擋流感病毒[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2004年

3 張忠霞;美完成2000多種流感病毒基因組測序工作[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2007年

4 劉英;我市采取措施積極防范[N];張家界日報;2009年

5 張忠霞;2000多種流感病毒基因組測序工作完成[N];人民日報;2007年

6 記者 陳芳 通訊員 賀黎;市疾控中心分離出3株A1型流感病毒[N];三峽日報;2006年

7 本報記者 劉霞;抱著“槍”睡大覺[N];科技日報;2009年

8 記者 馮海波 通訊員 劉慧嬋 鐘萱;三分鐘便可篩查病毒[N];廣東科技報;2009年

9 高原　黎藜 (記者 高原);美研究稱人對甲流免疫力超出預(yù)想[N];新華每日電訊;2009年

10 本報記者 明江;與流感病毒親密接觸[N];中國商報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 汪照國;2005～2011年青島地區(qū)流感病毒監(jiān)測與分子流行病學(xué)研究[D];山東大學(xué);2011年

2 戴新憲;PI3K/Akt信號通路下游關(guān)鍵分子對甲型流感病毒增殖的影響[D];北京交通大學(xué);2011年

3 劉洪波;流感病毒核酸測定分析前變量和生物危害暴露風(fēng)險評估[D];華中科技大學(xué);2012年

4 萬玉立;甲型流感病毒感染A549細(xì)胞的表達(dá)譜分析及相關(guān)基因功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

5 范克偉;Itk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在A型流感病毒與T細(xì)胞相互作用中的功能研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2012年

6 王佳;基于機(jī)器學(xué)習(xí)的A型流感病毒跨種傳播和抗原關(guān)系預(yù)測研究[D];華中科技大學(xué);2012年

7 張坤;豚鼠抗流感病毒相關(guān)因子研究及H9N2亞型禽流感病毒致病力分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 施強(qiáng);上海地區(qū)人甲型流感病毒基因變異與季節(jié)性流行關(guān)系的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 劉瑜;新型流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與初步活性研究[D];山東大學(xué);2011年

10 王曉杜;豬流感病毒感染細(xì)胞內(nèi)p53活性變化機(jī)制解析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王海靜;應(yīng)用SPR生物傳感器快速檢測A型流感病毒研究[D];河北師范大學(xué);2010年

2 高蕾;中國部分地區(qū)豬血清對甲型H1N1流感病毒的交叉免疫研究分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 田石華;重配制備B型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)毒株及無血清微載體培養(yǎng)流感病毒的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

4 郭瑩瑩;A型流感病毒NS1抑制劑的計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

5 展光建;犬H5N2流感病毒的分離鑒定及其分子生物學(xué)特征研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 李鑫;調(diào)控流感病毒基因片段的人編碼miRNA的發(fā)現(xiàn)算法研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 吳昊;抗菌肽及納米二氧化鈦噴液對甲型H1N1流感病毒抑制作用研究[D];吉林大學(xué);2011年

8 孟靜;甲型H1N1流感病毒毒株的分子特征及功能分析預(yù)測[D];山東大學(xué);2010年

9 向冬喜;納米銀抗流感病毒（H3N2）作用及機(jī)制研究[D];大連大學(xué);2011年

10 閆朝武;華南地區(qū)小種群禽類中H9N2亞型流感病毒特性研究[D];汕頭大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：常見流感病毒分型基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：383871