本文關(guān)鍵詞：二氮嗪后處理對(duì)大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,觀察二氮嗪后處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷心臟功能的影響。利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù),觀察二氮嗪后處理對(duì)大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化,為尋找新的藥物后處理作用靶點(diǎn)和潛在的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法： 1.建立Langendorff大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型。18只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(Nor)、缺血再灌注損傷組(Con)和二氮嗪后處理組(DZ),每組6只。 灌注方案： Nor組：持續(xù)灌注Kerbs-Henseleit緩沖液(K-H液)120min,無(wú)缺血再灌注損傷。Con組和DZ組：缺血前先灌注K-H液平衡20min,灌注4℃St.Thomas停跳液,使全心缺血40min后,按以下方案灌注：①Con組：灌注K-H液60min；②DZ組：灌注K-H液前給予50μmol/L二氮嗪2min,繼之K-H液58min。觀察各組平衡末及灌注末心率(HR)、左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、以及最大dp/dt等心功能的變化。 2.差速離心和Nycodenz密度梯度離心分離純化大鼠心肌線粒體,透射電鏡驗(yàn)證其純度。 3.提取線粒體蛋白質(zhì),采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,利用PDQuest8.0軟件分析各組蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。選取差異在2倍以上的蛋白質(zhì)點(diǎn),采用MALDI-TOF-MS鑒定。 4. Western blot法回復(fù)驗(yàn)證部分差異蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,證實(shí)雙向電泳結(jié)果的可靠性。 結(jié)果： 1.平衡末各組間心功能無(wú)明顯差異,續(xù)灌末Nor組和DZ組心功能明顯優(yōu)于Con組(P0.05)： 2. Western blothe和透射電鏡證實(shí)了Nycodenz密度梯度離心法提取的線粒體純較高； 3.對(duì)各組線粒體蛋白進(jìn)行2-DE,每張膠上檢測(cè)出513±27個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)；PDQuest8.0軟件分析后得到14個(gè)差異蛋白質(zhì),經(jīng)MALDI-TOF-MS分析,成功鑒定出6個(gè)蛋白； 4.DZ組與Con組比較發(fā)現(xiàn)：NADH脫氫酶黃素蛋白1(NDUFV1)、2-酮戊二酸脫氫酶(OGDH)、NADH脫氫酶鐵硫蛋白1(NDUFS1)表達(dá)升高。有兩個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)被鑒定為ATP合酶a亞基,其中一個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)升高(SSP7704),而另一個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)降低(SSP2017)。 結(jié)論： 1.二氮嗪后處理能夠減輕心肌缺血/再灌注損傷,有保護(hù)心肌、改善心功能的作用。 2.①二氮嗪后處理能通過(guò)上調(diào)NDUFV1和NDUFS1的表達(dá),維系線粒體呼吸鏈的穩(wěn)定,促進(jìn)能量合成,保障心臟的能量供應(yīng)。 ②二氮嗪處理通過(guò)上調(diào)OGDH的表達(dá),促進(jìn)丙酮酸的氧化脫羧,為乙酰CoA進(jìn)入三羧酸循環(huán)做準(zhǔn)備,保障有氧代謝的正常進(jìn)行。 3.缺血再灌注損傷會(huì)造成ATP合酶a亞基的降解,而二氮嗪開(kāi)放線粒體敏感性鉀通道以后能在一定程度上緩解這種現(xiàn)象的發(fā)生。 4. Nycodenz不連續(xù)密度梯度離心法可獲得較高純度的心肌線粒體。
【關(guān)鍵詞】：心肌缺血再灌注損傷 二氮嗪后處理 線粒體蛋白質(zhì)組學(xué) 2-DE
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：
【目錄】：

• 中英文縮略詞3-4
• 目錄4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料11-14
• 方法14-34
• 結(jié)果34-44
• 討論44-47
• 結(jié)論47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-66
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 致謝66-68
• 作者簡(jiǎn)介68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：383627