本文關(guān)鍵詞：CD38缺失對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性因子表達(dá)和分泌的影響及其分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的：動(dòng)脈粥樣硬化是許多心血管疾病的重要成因。大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)和臨床資料表明，炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其機(jī)制與巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌大量炎性因子，促使泡沫細(xì)胞生成等密切相關(guān)。CD38是具有ADPR (ADP-ribosyl)環(huán)化酶和水解酶活性的雙功能酶，它可分別催化NAD+生成cADPR和催化cADPR降解成ADPR，其酶活性位點(diǎn)均定位于胞外結(jié)構(gòu)域。我們的前期實(shí)驗(yàn)顯示，CD38基因缺失可使高脂飲食誘導(dǎo)的ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化損傷明顯加重。本文旨在探討CD38對(duì)巨噬細(xì)胞活化的影響及其可能的分子機(jī)制，從而為進(jìn)一步闡明CD38在動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用及其機(jī)制提供線索和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)和培養(yǎng)：給野生型和CD38基因敲除小鼠腹腔注射0.5ml3%巰基乙醇酸鈉誘導(dǎo)其巨噬細(xì)胞分泌，三天后收集小鼠腹腔的巨噬細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)，，經(jīng)鑒定后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.巨噬細(xì)胞基因表達(dá)及炎性因子分泌：取原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細(xì)胞并用LPS (1μg/ml)對(duì)其進(jìn)行刺激，實(shí)驗(yàn)分為4組每組3個(gè)樣本：①野生型(W.T.)未刺激組；②野生型(W.T.) LPS刺激組；③CD38-/-未刺激組；④CD38-/-LPS刺激組。利用RT-PCR或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)TLR4和相關(guān)炎性因子如TNF-α，IL-1β及巨噬細(xì)胞炎癥趨化因子MCP-1的mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)用Western Blot技術(shù)對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析。 結(jié)果：1.鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，與文獻(xiàn)描述相符，確認(rèn)為巨噬細(xì)胞。2. CD38缺失使LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性因子分泌及相關(guān)蛋白表達(dá)升高①LPS刺激后W.T.組與CD38-/-組均出現(xiàn)TLR4表達(dá)量升高，炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌增加；②與LPS刺激W.T.組比較，CD38-/-組中TLR4及NF-κB表達(dá)量顯著升高；③LPS刺激后CD38-/-組炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌量較W.T.組增加。 結(jié)論：LPS可明顯誘導(dǎo)CD38-/-小鼠原代培養(yǎng)巨噬細(xì)胞的M1型炎性因子分泌，提示CD38基因缺失可顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，其機(jī)制可能與CD38缺失誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4-NF-κB通路活化，進(jìn)而促進(jìn)炎性因子的合成與分泌有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD38 動(dòng)脈粥樣硬化 巨噬細(xì)胞 炎性反應(yīng) TLR4 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 緒論11-16
• 1.1 CD38 與動(dòng)脈粥樣硬化11-16
• 1.1.1 CD38 簡(jiǎn)述11-12
• 1.1.2 動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生及通路12-13
• 1.1.3 巨噬細(xì)胞(Macrophage)與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)13-14
• 1.1.4. NF-κB 與動(dòng)脈粥樣硬化14-15
• 1.1.5 TLR/NF-ΚB 信號(hào)通路15-16
• 第2章 CD38 基因敲除小鼠原代巨噬細(xì)胞的分離和培養(yǎng)16-24
• 2.1 引言16
• 2.2 材料和方法16-20
• 2.2.1 CD38 基因敲除鼠的鑒定16-17
• 2.2.2 巨噬細(xì)胞（Macrophage）的原代培養(yǎng)及基因型鑒定17-20
• 2.3 結(jié)果20-23
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鑒定20-21
• 2.3.2 巨噬細(xì)胞（Macrophage）原代培養(yǎng)及基因型鑒定21-23
• 2.4 討論23-24
• 2.4.1 基因敲除小鼠的分類(lèi)23
• 2.4.2 巨噬細(xì)胞的分型23-24
• 第3章 CD38 缺失在 LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)中的作用及其機(jī)制24-33
• 3.1 引言24
• 3.2 材料和方法24-28
• 3.2.1 TLR4 表達(dá)水平檢測(cè)24-26
• 3.2.2 NF-κB 表達(dá)量檢測(cè)26
• 3.2.3 熒光定量 PCR 檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎性因子分泌26-28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-32
• 3.3.1 LPS 促進(jìn) CD38-/-與 WT 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 TLR4 的表達(dá)28-29
• 3.3.2 LPS 促進(jìn) CD38-/-與 WT 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 NF-κB 的表達(dá)29-30
• 3.3.3 LPS 促進(jìn) CD38-/-與 WT 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎性因子的表達(dá)30-32
• 3.4 討論32-33
• 3.4.1 LPS 與 TLR4 作用方式32
• 3.4.2 LPS 與 NF-κB 作用方式32-33
• 第4章 結(jié)論33-34
• 4.1 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 附錄38-40
• 綜述40-54
• 參考文獻(xiàn)47-54

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：381977