本文關(guān)鍵詞：CpG寡聚核苷酸在核酸疫苗中免疫增強(qiáng)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：細(xì)菌DNA中含有非甲基化的CpG基序,對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的免疫細(xì)胞具有免疫刺激效應(yīng),而在哺乳動(dòng)物中,由于CpG基序通常以甲基化的形式存在,所以不具有免疫刺激作用。人工合成的含有非甲基化CpG基序的寡聚核苷酸即CpG ODN可以模擬細(xì)菌DNA的免疫刺激效應(yīng),提高機(jī)體的免疫反應(yīng)。 白色念珠菌是一種條件致病菌。目前,主要通過一些抗真菌藥類對(duì)此菌引起的相應(yīng)感染疾病進(jìn)行治療,但系統(tǒng)性白色念珠菌感染,服用藥物后致死率仍高達(dá)70%,因此研制有效的疫苗抵御白色念珠菌的感染十分重要。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),白色念珠菌熱休克蛋白90(HSP90)含有三個(gè)抗原表位即B、C和H,其中表位C是保守表位,幾乎能與所有系統(tǒng)性白色念珠菌感染的病人血清發(fā)生反應(yīng),因此將其視為候選疫苗。本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了含有白色念珠菌熱休克蛋白HSP90表位C的重組質(zhì)粒pD-HSP90C作為核酸疫苗,但其免疫原性較弱,需加入疫苗佐劑以加強(qiáng)免疫效應(yīng)。 本論文對(duì)CpG ODN作為白色念珠菌核酸疫苗佐劑是否具有顯著的免疫增強(qiáng)效用進(jìn)行探討。將CpG DNA基序構(gòu)建于真核表達(dá)載體pcDNA3.1和含有HSP90C的核酸疫苗pD-HSP90C中,形成了pD-CpG和pD-HSP90C-CpG兩種重組質(zhì)粒。將pD-CpG與核酸疫苗pD-HSP90C聯(lián)合免疫C57BL/6J小鼠、pD-HSP90C-CpG單獨(dú)免疫小鼠,采用肌肉注射并電轉(zhuǎn)方式,免疫兩次,每次間隔時(shí)間為兩周,第二次免疫兩周后對(duì)小鼠進(jìn)行眼球取血,收集血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。運(yùn)用Western blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)免疫小鼠C57BL/6J的抗血清中抗體特異性；ELISA實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠C57BL/6J抗血清中特異性抗體IgG、IgG1、 IgG2b的抗體滴度；ELISA試劑盒測(cè)定小鼠抗血清中IL-2、IL-4的含量。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,pD-CpG與核酸疫苗pD-HSP90C共同免疫小鼠組以及pD-HSP90C-CpG單獨(dú)免疫小鼠組,其血清中特異性抗體IgG、 IgG2b抗體滴度及IL-2含量明顯高于核酸疫苗單獨(dú)注射組,而特異性抗體IgG1抗體滴度并未增強(qiáng)、IL-4含量降低。pD-CpG聯(lián)合核酸疫苗pD-HSP90C免疫小鼠與pD-HSP90C-CpG單獨(dú)免疫小鼠的免疫效果相比無明顯差異。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明CpG ODN作為疫苗佐劑有效的加強(qiáng)了核酸疫苗pD-HSP90C的免疫效應(yīng),增強(qiáng)了Th1型免疫應(yīng)答,下調(diào)Th2型細(xì)胞因子的表達(dá),調(diào)節(jié)Th1/Th2比例,為CpG ODN在疫苗佐劑領(lǐng)域中的應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：CpG ODN 核酸疫苗 佐劑
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 中英文~.寫9-10
• 第一章 綜述10-21
• 1 核酸疫苗10-13
• 1.1 核酸疫苗的研究10-11
• 1.2 核酸疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)11-12
• 1.3 核酸疫苗的應(yīng)用及發(fā)展前景12-13
• 2 疫苗佐劑13-16
• 2.1 鋁佐劑13
• 2.2 脂質(zhì)體13-14
• 2.3 細(xì)胞因子14
• 2.4 乳化油佐劑14
• 2.5 皂角苷佐劑14-15
• 2.6 免疫刺激復(fù)合物(ISCOM)15
• 2.7 多肽疫苗佐劑15
• 2.8 Toll樣受體激動(dòng)劑15-16
• 3 CpG及其免疫作用16-19
• 3.1 CpG概述16
• 3.2 CpG免疫特性的研究16-19
• 3.3 CpG的應(yīng)用前景19
• 4 白色念珠菌簡(jiǎn)介19-20
• 5 本研究目的意義20-21
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法21-35
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器21-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑21-22
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-35
• 2.1 重組質(zhì)粒pD-HSP90C、pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的制備22-26
• 2.2 重組蛋白rp-HSP90C的制備26-28
• 2.3 CpG在核酸疫苗pD-HSP90C中免疫增強(qiáng)作用研究28-34
• 2.4 數(shù)據(jù)分析34-35
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析35-47
• 1 重組質(zhì)粒pD-HSP90C、pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的鑒定結(jié)果35-37
• 1.1 核酸疫苗pD-HSP90C的酶切鑒定結(jié)果35
• 1.2 重組質(zhì)粒pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的酶切鑒定結(jié)果35-36
• 1.3 重組質(zhì)粒pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的基因檢測(cè)分析36-37
• 2 重組蛋白rp-HSP90C的純化以及濃度測(cè)定結(jié)果分析37-38
• 2.1 重組蛋白rp-HSP90C純化結(jié)果37
• 2.2 重組蛋白rp-HSP90C濃度測(cè)定結(jié)果37-38
• 3 CpG對(duì)核酸疫苗pD-HSP90C免疫增強(qiáng)作用的影響38-47
• 3.1 Western blot分析免疫小鼠抗血清中抗rp-HSP90C的抗體特異性38-40
• 3.2 CpG對(duì)免疫小鼠抗血清中抗rp-HSP90C產(chǎn)生特異抗體滴度的影響40-44
• 3.3 CpG對(duì)免疫小鼠抗血清中IL-2、IL-4的影響44-47
• 第四章 討論47-49
• 1 目的基因片段的選擇47
• 2 CpG增強(qiáng)了Th1型免疫應(yīng)答47-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：381660