本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-370在高頻脈沖電磁場下對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增值調(diào)控作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是存在于骨髓基質(zhì)系統(tǒng)中的一種組織干細(xì)胞,具有自我更新能力和多向分化潛能,可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等類型的細(xì)胞,是組織工程理想的種子細(xì)胞來源。 小分子RNA (microRNA)是一組由約為20～24個核苷酸組成的非編碼小分子RNA,其廣泛存在于動物、植物和病毒中,它們不具有開放閱讀框(ORF),不編碼蛋白質(zhì),但卻參與機體的各種重要的生理和病理過程,它們能夠與靶標(biāo)基因mRNA的3'-UTR(untranslated region)區(qū)的堿基互補配對,從而介導(dǎo)mRNA降解或抑制mRNA轉(zhuǎn)錄后水平的表達(dá),從而導(dǎo)致靶標(biāo)蛋白表達(dá)的下降,近十年來的研究發(fā)現(xiàn)microRNA在細(xì)胞的增殖、分化、和凋亡等多種生命活動中發(fā)揮著重要作用。但是,microRNA是否調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分化卻鮮有報道。 本實驗前期工作證明,高頻脈沖電磁場(High-Frequency Pulsed Electromagnetic Fields, HF-PEMFs)能夠?qū)Υ笫蠊撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem cells, BMSCs)的增殖和誘導(dǎo)成骨產(chǎn)生抑制作用。然而眾多調(diào)控基因中究竟是哪種基因?qū)?xì)胞增殖及分化產(chǎn)生了影響?通過文獻(xiàn)的查閱和生物信息學(xué)軟件的預(yù)測,作者發(fā)現(xiàn)microRNA家族中的microRNA-370基因的高表達(dá)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7, BMP-7)起到負(fù)調(diào)控作用,從而導(dǎo)致大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem cells, BMSCs)增值受到抑制。目的： 通過檢測高頻脈沖電磁場刺激下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其成骨細(xì)胞中microRNA-370基因表達(dá)的高低對骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7, BMP-7)的調(diào)控作用,從中推測microRNA-370的功能,證明其負(fù)向調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其成骨細(xì)胞向成骨分化的作用,從而,進(jìn)一步研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化中microRNA的作用。 方法： 1、分組應(yīng)用全骨髓細(xì)胞貼壁分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)SD大鼠股骨、脛骨中的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,將體外培養(yǎng)的第三代BMSCs分為施加HF-PEMF刺激組和不施加HF-PEMF的空白對照組。 2、磁場強度選擇：脈沖電磁場刺激強度300MHz,時間60min/d,分兩次進(jìn)行照射,持續(xù)作用15天。 3、在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。 4、Vonkossa鈣染色檢測鈣結(jié)節(jié)的形成。 5、基因芯片測定差異表達(dá)基因,選取microRNA差異基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,預(yù)測其趨勢。 結(jié)果：1.經(jīng)全骨髓細(xì)胞貼壁篩選法分離培養(yǎng)的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞符合大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞基本特征。2.通過生物信息學(xué)軟件成功預(yù)測MicroRNA-370對大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞中bmp-7蛋白具有調(diào)節(jié)作用。3.獲得高頻脈沖電磁場干預(yù)培養(yǎng)的骨髓間充值質(zhì)細(xì)胞和正常培養(yǎng)的骨髓間充值質(zhì)細(xì)胞的總RNA。4.利用Realtime-PCR觀察與對比MicroRNA-370在高頻脈沖電磁場干預(yù)組與正常培養(yǎng)組的大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞中的差異。表明MicroRNA-370在高頻脈沖電磁場干預(yù)組中的高表達(dá)不能起到抑制大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的調(diào)控作用。 結(jié)論： 1.用全骨髓細(xì)胞貼壁篩選法分離培養(yǎng)的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在體外培養(yǎng)被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞。 2.通過Realtime-PCR的結(jié)果可以推測MicroRNA-370對大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞中的bmp-7不具有負(fù)向調(diào)控作用。 3.酶化學(xué)法測定細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性法進(jìn)一步證明被轉(zhuǎn)染MicroRNA-370高頻電場刺激下的大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染組高頻電場刺激下的大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)上無差別。
【關(guān)鍵詞】：小分子RNA 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 高頻脈沖電磁場 成骨分化 定量聚合酶鏈?zhǔn)椒从?/strong> 凋亡
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 英文縮略語4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-15
• 材料15-50
• 結(jié)果50-57
• 結(jié)論57-58
• 討論58-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 綜述68-84
• 參考文獻(xiàn)79-84
• 致謝84-85
• 讀研期間已發(fā)表的論文85

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 許圣榮;趙勁民;蘇偉;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的實驗研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年05期

2 崔向榮;蘇偉;黃釗;覃萬安;;高頻脈沖電磁場對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年10期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張錦芳;miR-20調(diào)控人骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及機理研究[D];清華大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃釗;恒定強度1KHz電磁場對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化作用的探索性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

2 許嘯;miRNA-210在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨分化中的作用及意義[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-370在高頻脈沖電磁場下對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增值調(diào)控作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：381651

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