本文關(guān)鍵詞：研究TET1蛋白在體細(xì)胞重編程過程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：TET蛋白（Ten Eleven Translocation，TET）是一種加氧酶，于2009年首次報道，可催化DNA中胞嘧啶5位碳上的甲基形成羥甲基。TET酶的該催化功能與DNA去甲基化相關(guān)，隨后便引起了一陣基于DNA水平上表觀遺傳學(xué)的研究熱潮。而近年來，隨著誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）技術(shù)不斷地成熟，體細(xì)胞重編程技術(shù)也在表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域中得到了越來越多的重視。 iPS細(xì)胞誘導(dǎo)重編程技術(shù)是將Yamanaka四因子OKSM（Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）導(dǎo)入體細(xì)胞中，使得體細(xì)胞重新回到原始多能性狀態(tài)。隨著人們對于這一過程機(jī)制的不斷探索，重編程的效率也在不斷地提高。小分子化合物與轉(zhuǎn)錄因子的聯(lián)合應(yīng)用，也是目前科學(xué)家們最常用的重編程手段。例如維生素C，又稱抗壞血酸，一種小分子化合物，可高效提升重編程的效率。而高效重編程技術(shù)的建立，，也為科學(xué)家對細(xì)胞命運(yùn)調(diào)控中轉(zhuǎn)錄因子及信號通路的研究提供了一個新的平臺。 研究表明MEF細(xì)胞中的羥甲基胞嘧啶水平及TET1表達(dá)量均很低，而在mES細(xì)胞中羥甲基胞嘧啶及TET1蛋白的表達(dá)量均較高。所以猜測在體細(xì)胞重編程這一過程中，可能會有TET1蛋白的參與。為闡明TET1蛋白及羥甲基化胞嘧啶相關(guān)修飾在體細(xì)胞重編程過程中的生物學(xué)功能，本論文以鼠源細(xì)胞為實(shí)驗對象，以重編程技術(shù)為平臺，研究在此過程中，TET1蛋白所扮演的角色。我們通過兩種方式來研究TET1在重編程中的功能，第一種方法是用TET1基因敲除的MEF細(xì)胞進(jìn)行重編程，從功能缺失的角度去研究TET1蛋白在重編程過程中的重要性。另一種方法是過表達(dá)TET1蛋白的截短型——TET1CD，其本身含有TET1蛋白的催化活性區(qū)域，以獲得功能性實(shí)驗判斷TET1蛋白在這一過程中發(fā)揮的作用。 最后通過對實(shí)驗結(jié)果的分析我們發(fā)現(xiàn)，TET1蛋白在重編程中的功能是受到培養(yǎng)條件中維生素C調(diào)控的。在沒有維生素C的調(diào)控時，TET1不依靠MET過程而促進(jìn)重編程。當(dāng)體系內(nèi)含有維生素C時，TET1缺失會提高重編程效率，過表達(dá)TET1蛋白會抑制重編程進(jìn)程。而且TET1蛋白在維生素C介導(dǎo)下特異性調(diào)控基因組MET相關(guān)位點(diǎn)羥甲基胞嘧啶的形成，阻礙MET過程，進(jìn)而抑制重編程進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：TET1 重編程 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞 DNA 甲基化 維生素C
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 緒論10-20
• 1.1 體細(xì)胞重編程10-13
• 1.1.1 干細(xì)胞與誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞10-11
• 1.1.2 體細(xì)胞重編程11-12
• 1.1.3 體細(xì)胞重編程中的表觀遺傳調(diào)控12-13
• 1.2 表觀遺傳學(xué)概述13-16
• 1.2.1 DNA 甲基化13-14
• 1.2.2 hmC 及 DNA 去甲基化14-16
• 1.3 TET 蛋白研究概況16-19
• 1.4 立題依據(jù)及意義19-20
• 第2章 體細(xì)胞重編程過程中 TET 蛋白的功能研究20-33
• 2.1 實(shí)驗?zāi)康?/span>20
• 2.2 實(shí)驗材料及方法20-28
• 2.2.1 試劑耗材及儀器設(shè)備20-24
• 2.2.2 實(shí)驗方法24-28
• 2.3 實(shí)驗結(jié)果及討論28-33
• 2.3.1 體細(xì)胞重編程過程中過表達(dá) TETCD 蛋白28-31
• 2.3.2 利用 TET1 基因敲除 MEF 細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞重編程31
• 2.3.3 pre-iPS 體系中探索 TET1 蛋白的功能31-33
• 第3章 重編程過程中 TET1 蛋白功能受維生素 C 調(diào)節(jié)33-38
• 3.1 實(shí)驗?zāi)康?/span>33
• 3.2 實(shí)驗材料及方法33
• 3.3 實(shí)驗結(jié)果與討論33-38
• 3.3.1 維生素 C 對 TET1CD 的調(diào)節(jié)作用33-36
• 3.3.2 維生素 C 對 TET1 蛋白的調(diào)節(jié)作用36-38
• 第4章 維生素 C 調(diào)節(jié) TET1 蛋白抑制重編程的機(jī)制研究38-47
• 4.1 實(shí)驗?zāi)康?/span>38
• 4.2 實(shí)驗材料及方法38-41
• 4.2.1 試劑耗材及儀器設(shè)備38-39
• 4.2.2 實(shí)驗方法39-41
• 4.3 實(shí)驗結(jié)果與討論41-47
• 4.3.1 重編程中過表達(dá) TET1CD 對細(xì)胞黏附及上皮分化的影響41-45
• 4.3.2 內(nèi)源性 TET1 蛋白對 MET 過程的影響45-47
• 第5章 結(jié)論與討論47-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 附表一 本研究中所用引物56
• 附表二 本研究中所用抗體56-58
• 攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果58-59
• 致謝59-60

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李紫聰;黃曉靈;劉德武;吳珍芳;;轉(zhuǎn)基因動物生物反應(yīng)器研究進(jìn)展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2013年04期

2 常勝合;徐立;李敬陽;孫威;王甲水;許桂鶯;孫佩光;吳瓊;金志強(qiáng);舒海燕;;提高香蕉胚性愈傷誘導(dǎo)成功率的可能途徑[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年19期

3 姜英浩;張菊;盧茲凡;;干細(xì)胞倫理之爭的“終結(jié)者”——談諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎獲得者山中伸彌[J];醫(yī)學(xué)爭鳴;2013年05期

4 徐麗萍;龍大宏;校對;;誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及其在神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用前景[J];解剖學(xué)研究;2013年05期

5 Jian Shu;Hongkui Deng;;Lineage Specifers:New Players in the Induction of Pluripotency[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

6 Xiao-Bing Zhang;;Cellular Reprogramming of Human Peripheral Blood Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

8 Yi-ye Zhou;Fanyi Zeng;;Integration-free Methods for Generating Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 Menghua Wu;Guilai Chen;Baoyang Hu;;Induced Pluripotency for Translational Research[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

10 Xiao Lu;Tongbiao Zhao;;Clinical Therapy Using iPSCs:Hopes and Challenges[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 周燦權(quán);李宇彬;;研究中的生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)[A];中華醫(yī)學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會第二次全國生殖臨床學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2012年

2 張可華;袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險因素[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細(xì)胞建系及其細(xì)胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞輸注促進(jìn)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細(xì)胞向β細(xì)胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

3 朱玉德;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其與膠質(zhì)瘤血管發(fā)生的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2013年

4 叢義梅;豬原始生殖細(xì)胞體內(nèi)跟蹤、體外培養(yǎng)及遺傳印記的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 陳雪梅;人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)和神經(jīng)誘導(dǎo)分化過程中基因組遺傳變異的動態(tài)變化[D];鄭州大學(xué);2013年

6 李遠(yuǎn);雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細(xì)胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

7 靳木子;阿爾巴斯白絨山羊與綿羊胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

8 袁建龍;利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因絨山羊的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

9 梅宇欽;黃酮類化合物庫內(nèi)小分子4a經(jīng)由PPAR-β-Mfn2-[Ca~(2+)]_M信號調(diào)控胚胎干細(xì)胞神經(jīng)分化[D];浙江大學(xué);2013年

10 楊梅;NAIF1基因在胃癌細(xì)胞中的功能與機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王振;造血系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的慢病毒載體構(gòu)建及表達(dá)[D];山東師范大學(xué);2013年

2 李小帥;營養(yǎng)強(qiáng)化布丁加工研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2013年

3 侯歌;胃癌組織中PCNA、Ki-67、Nanog、Oct-4的表達(dá)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

4 陳明;骨髓單個核細(xì)胞在腦缺血大鼠腦內(nèi)受損區(qū)域的定向分化[D];鄭州大學(xué);2013年

5 張艷玲;E-cadherin、β-catenin及Oct-4、Sox-2表達(dá)與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

6 費(fèi)璇;KLF4在大鼠晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)再生過程中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2013年

7 雷學(xué)華;重編程因子對小鼠組蛋白H3K4/27甲基化酶基因啟動子活性的影響[D];安徽大學(xué);2013年

8 解智慧;干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SOX2在食管鱗癌中的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

9 鄧玉金;應(yīng)用小鼠ESCs體外誘導(dǎo)己分化體細(xì)胞為iPSCs的異性來源鑒別體系研究[D];西南大學(xué);2013年

10 趙龍彪;烏司他丁對急性心肌梗死大鼠心臟的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：研究TET1蛋白在體細(xì)胞重編程過程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：379830