抗生素的使用使細(xì)菌感染類疾病得到了有效的控制,但隨著耐藥菌株的出現(xiàn)限制了人們治療細(xì)菌感染性疾病的能力,感染性疾病再次對人類健康造成嚴(yán)重的威脅。銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)是一種條件致病菌,是醫(yī)院獲得性感染的三大致病菌之一。它能引起各種不同的急性或慢性感染,特別是對于免疫功能缺陷或是患有慢性疾病的人群�？股氐拈L期使用及濫用使銅綠假單胞菌對許多抗生素產(chǎn)生了嚴(yán)重的耐藥性,這導(dǎo)致銅綠假單胞菌感染類疾病在臨床治療中面臨了極大的困難。 細(xì)菌的致病力取決于細(xì)菌所產(chǎn)生的致病因子(或毒性因子)及其對宿主的損傷作用。致病菌通過釋放毒性因子來破壞宿主細(xì)胞的正常生理功能,甚至導(dǎo)致宿主細(xì)胞的死亡。因此,通過抑制細(xì)菌感染宿主過程中所依賴的毒性因子,將可以抑制細(xì)菌的致病性,達(dá)到控制感染的目的。因此,對細(xì)菌致病途徑及機(jī)理的研究,并在此基礎(chǔ)上研發(fā)抗細(xì)菌致病性藥物,已成為病原微生物和抗生素研究領(lǐng)域的一個全新的重要方向。 中藥在我國具有數(shù)千年的歷史,其防治感染性疾病的能力被人們所熟知。本課題以中藥中“清熱解毒”類藥材為篩選對象,利用熒光素酶(Luciferase)基因luxCDAB...

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【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 緒論
    1.1 銅綠假單胞菌
        1.1.1 銅綠假單胞菌的致病機(jī)理
        1.1.2 銅綠假單胞茵Ⅲ型分泌系統(tǒng)
        1.1.3 銅綠假單胞菌生物被膜
        1.1.4 銅綠假單胞菌運(yùn)動性
        1.1.5 銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制
        1.1.6 銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)及致病性
        1.1.7 銅綠假單胞菌喹諾酮類信號分子
    1.2 抗感染中藥
    1.3 研究目的和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.3 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑及配置
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 中藥粗提物的制備
        2.2.2 層培養(yǎng)基擴(kuò)散法及半固體混藥法檢測基因表達(dá)
        2.2.3 基因表達(dá)液體檢測法(酶標(biāo)檢測儀)
        2.2.4 細(xì)菌運(yùn)動性檢測
        2.2.5 生物被膜(biofilm)的測定
        2.2.6 彈性蛋白酶檢測
        2.2.7 濃硫酸-地衣酚法測定鼠李糖脂含量及活性
        2.2.8 細(xì)胞毒性檢測
        2.2.9 果蠅感染模型
        2.2.10 銅綠假單胞菌藻酸鹽包埋顆粒的制備
        2.2.11 大鼠肺部感染操作步驟
        2.2.12 感染大鼠給藥分組
        2.2.13 肉眼觀測大鼠肺部感染分級
        2.2.14 大鼠肺病理切片制作
        2.2.15 大鼠血清樣本的采集和制備(ELISA法檢測大鼠血清中TNF-α濃度)
        2.2.16 大鼠肺組織中活菌計(jì)數(shù)
        2.2.17 雙親株雜交將啟動子.報(bào)道子序列整合于染色體
        2.2.18 PQS提取及薄層層析檢測
        2.2.19 薄層層析所分離物質(zhì)的刮板及濃縮
        2.2.20 高效液相(HPLC)分析
        2.2.21 質(zhì)譜分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 20 種中藥粗提物對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
        3.1.1 中藥粗提庫的構(gòu)建
        3.1.2 中藥對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
    3.2 艾葉對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
        3.2.1 艾葉水提物抑制銅綠假單胞菌毒性因子的表達(dá)
        3.2.2 艾葉水提物抑制銅綠假單胞菌的叢動能力
    3.3 黃芩粗提物對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
        3.3.1 黃芩粗提物對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
        3.3.2 黃芩粗提物抑制銅綠假單胞菌叢動能力
    3.4 黃芩有效成分黃芩苷對銅綠假單胞致病性的抑制
        3.4.1 黃芩苷對銅綠假單胞菌毒性因子表達(dá)的影響
        3.4.2 黃芩苷明顯抑制細(xì)菌銅綠假單胞菌叢動能力
        3.4.3 黃芩苷抑制彈性蛋白酶以及鼠李糖脂的合成
        3.4.4 黃芩苷削弱銅綠假單胞菌對真核細(xì)胞的細(xì)胞毒性
        3.4.5 果蠅感染模型中黃芩苷對銅綠假單胞菌致病性的抑制
        3.4.6 大鼠肺部感染模型中黃芩苷對銅綠假單胞菌致病性的抑制
    3.5 黃芩苷抑制銅綠假單胞菌致病性的作用機(jī)制研究
        3.5.1 GacA途徑與黃芩苷的作用
        3.5.2 Rh1R/I-C4-HSL系統(tǒng)與黃芩苷的作用
        3.5.3 黃芩苷以PQS系統(tǒng)為靶點(diǎn)來抑制Ⅲ型分泌系統(tǒng)的表達(dá)
        3.5.4 黃芩苷對銅綠假單胞菌叢動能力的抑制作用與調(diào)控蛋白PqsR無關(guān)
        3.5.5 黃芩苷對PQS系統(tǒng)信號分子產(chǎn)生的影響
        3.5.6 未知物質(zhì)的提取分離及鑒定
    3.6 銅綠假單胞菌PQS群體感應(yīng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)對致病因子調(diào)節(jié)途徑的研究
        3.6.1 PQS可抑制細(xì)菌叢動能力,此抑制作用不依賴于調(diào)控蛋白PqsR的存在
        3.6.2 PAO1蹭行運(yùn)動需要調(diào)控蛋白PqsR的存在；PQS信號分子及調(diào)控蛋白PqsR對PAO1的泳動能力沒有影響
        3.6.3 外加PQS對影響銅綠假單胞菌運(yùn)動相關(guān)基因的影響
        3.6.4 PQS對銅綠假單胞菌生物被膜的促進(jìn)作用不依賴于Las和Rhl系統(tǒng)
        3.6.5 PQS對銅綠假單胞菌生物被膜的促進(jìn)作用依賴于RetS/GacAS/Rsm系統(tǒng)
第四章 討論
    4.1 中藥中抗致病性成分的篩選
    4.2 黃芩苷抗致病因子的作用機(jī)制研究
    4.3 黃芩苷抑制銅綠假單胞菌叢動能力的研究
    4.4 PQS信號分子及調(diào)控蛋白PqsR對銅綠假單胞菌運(yùn)動性的影響
    4.5 銅綠假單胞菌信號分子PQS促進(jìn)生物被膜形成的機(jī)制研究
    4.6 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
作者簡介



本文編號：3781328