本文關(guān)鍵詞：金葡菌SraP操縱子中GtfA和GtfB的序列分析及其調(diào)控SraP糖基化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】分析臨床金葡菌中SraP操縱子中GtfA和GtfB的序列差異，探究金葡菌中的GtfA和GtfB能否糖基化Srap及相關(guān)作用機制。 【方法】搜集55株臨床金葡菌分離株，分別用三個獨立的實時TaqManPCR實驗擴增SraP, MecA和PVL基因。從金葡菌基因組擴增GtfA、GtfB以及GtfA-GtfB,并克隆到pETDuet-1，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pETDuet-A，pETDuet-B和pETDuet-AB。隨后再從金葡菌基因組擴增SraP1-743，并分別克隆到pETDuet-A，pETDuet-B和pETDuet-AB的另一個多克隆位點，構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pETDuet-AS，pETDuet-BS和pETDuet-ABS。最后采用免疫印跡實驗與凝集素印跡實驗分別檢測SraP1-743的表達及其糖基化表型。 【結(jié)果】根據(jù)CLSI推薦標準，，55例臨床金葡菌分離株中35(63.6%)例是MRSA(耐甲氧西林）金葡菌。RAPD-PCR分析發(fā)現(xiàn)55例臨床金葡菌分離株中有14個不同的RAPD圖譜(I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII和XIV)。結(jié)構(gòu)同源性分析發(fā)現(xiàn)GtfA、GtfB分別和幾個糖基化轉(zhuǎn)移酶有重要的結(jié)構(gòu)相似性。免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)，當GtfA、GtfB和SraP1-743在大腸桿菌共表達時，用抗S-tag抗體在95-kD和120-kD附近均能檢測到S-SraP1-743融合蛋白。只有GtfA（或）GtfB和SraP1-743在大腸桿菌共表達時，則只能在95-kD附近檢測到S-SraP1-743融合蛋白。凝集素印跡實驗發(fā)現(xiàn)，當GtfA、GtfB和SraP1-743在大腸桿菌共表達時，sWGA只能與120-kD附近的S-SraP1-743融合蛋白起反應(yīng)。 【結(jié)論】本研究發(fā)現(xiàn)SraP存在于所檢測的臨床分離金葡菌中，RAPD-PCR顯示金葡菌具有廣泛的基因型多樣性，GtfA和GtfB在臨床分離金葡菌中高度保守。GtfA和GtfB能夠啟動GlcNAc糖基化SraP,但是單一的GtfA或GtfB不能啟動GlcNAc糖基化SraP。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 SraP GtfA GtfB 糖基化轉(zhuǎn)移酶
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378.11
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 前言6-10
• 參考文獻8-10
• 摘要10-11
• Abstract11-12
• 緒言12-13
• 實驗材料13-18
• 實驗方法18-34
• 實驗結(jié)果34-43
• 討論43-45
• 參考文獻45-47
• 結(jié)論47-48
• 綜述48-70
• 參考文獻65-70
• 致謝70-71
• 附錄71-92

【共引文獻】

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本文編號：377335