本文關(guān)鍵詞：動物內(nèi)源性多肽CGA-N46生物學(xué)特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來，致病真菌感染日趨嚴(yán)重，并且超級耐藥菌株也不斷地出現(xiàn)，應(yīng)加大開發(fā)新型抗菌藥物的力度。CGA-N46是一種新型抗真菌多肽。研究其穩(wěn)定性，對不同真核細胞的作用，對克柔念珠菌DNA和菌體蛋白作用，為將其開發(fā)成新型抗真菌制劑奠定理論基礎(chǔ)。 CGA-N46的穩(wěn)定性研究表明，100℃，加熱15min；反復(fù)凍融6次其抑菌活性基本保持不變；在室溫下放置72h會影響CGA-N46的抑菌活性，但無顯著性改變（P＞0.05）；pH范圍在4.0-7.0時，CGA-N46抑菌活性完全保持不變。 采用常規(guī)試管法和分光光度法研究CGA-N46對紅細胞的溶血作用，結(jié)果顯示CGA-N46即使在8倍MIC濃度下，都不會引起體外溶血；MTT法檢測了CGA-N46對肺癌細胞A549和正常雞胚成纖維細胞（CEF）體外增殖的影響，結(jié)果表明，CGA-N46對肺癌細胞A549的增殖具有較強的抑制作用，作用72h時抑制率達到了60.53%，對雞胚成纖維細胞（CEF）的體外增殖無抑制作用。CGA-N46與抗生素氟康唑、特比萘芬聯(lián)合使用對克柔念珠菌的抑制作用表現(xiàn)為相加作用，不僅能夠提高其抑菌活性還能減少抗生素的使用劑量。 紫外分光光度計檢測CGA-N46不會導(dǎo)致克柔念珠菌體內(nèi)紫外吸收物質(zhì)的泄露。DNA－CGA-N46凝膠阻滯實驗證明CGA-N46不能使克柔念珠菌DNA在體外發(fā)生降解。流式細胞儀檢測CGA-N46會引起克柔念珠菌的S期細胞比例升高，G2/M期細胞比例降低， CGA-N46對PCR反應(yīng)的影響表明在DNA合成的過程中，CGA-N46能夠影響TaqDNA聚合酶的功能使目的DNA的合成受到抑制作用。SDS-PAGE電泳檢測表明CGA-N46能夠抑制克柔念珠菌體內(nèi)蛋白的正常表達。 因此，CGA-N46具有熱穩(wěn)定性，體外結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，室溫存放時間長，酸堿穩(wěn)定性好，溶血性低，，對癌細胞有抑制作用，對正常成纖維細胞生長無影響，與抗生素聯(lián)合用藥表現(xiàn)相加作用，CGA-N46能夠阻滯細胞分裂，將細胞阻滯在S期，PCR實驗結(jié)果也證實CGA-N46阻滯DNA合成。同時CGA-N46對蛋白質(zhì)合成也有影響。
【關(guān)鍵詞】：抗真菌肽 體外穩(wěn)定性 溶血性 抑癌活性 聯(lián)合用藥 DNA凝膠阻滯實驗 流式細胞技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 前言10-20
• 1.1 生物活性肽10-11
• 1.2 抗菌肽簡介11-18
• 1.2.1 抗菌肽的結(jié)構(gòu)11-12
• 1.2.2 抗菌肽的生物學(xué)活性12
• 1.2.3 抗菌肽對不同細胞的作用12-13
• 1.2.4 抗菌肽的作用機制13-15
• 1.2.5 抗菌肽的來源15-17
• 1.2.6 與傳統(tǒng)抗生素相比的優(yōu)勢17-18
• 1.2.7 存在問題18
• 1.3 CGA-N46 的研究進展18-19
• 1.3.1 嗜鉻粒蛋白18
• 1.3.2 CGA-N4618-19
• 1.4 本論文的研究目的和內(nèi)容19-20
• 1.4.1 研究目的19
• 1.4.2 研究內(nèi)容19-20
• 第二章 實驗材料和方法20-36
• 2.1 實驗材料20-24
• 2.1.1 實驗菌種和實驗動物20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要儀器21-22
• 2.1.4 培養(yǎng)基22
• 2.1.5 主要溶液22-24
• 2.2 實驗方法24-36
• 2.2.1 CGA-N46 的制備24-25
• 2.2.2 CGA-N46 的穩(wěn)定性分析25-26
• 2.2.2.1 加熱溫度和加熱時間的影響25-26
• 2.2.2.2 凍融次數(shù)的影響26
• 2.2.2.3 室溫放置時間的影響26
• 2.2.2.4 pH 值的影響26
• 2.2.3 CGA-N46 對不同真核細胞的作用26-31
• 2.2.3.1 CGA-N46 對紅細胞的溶血作用26-28
• 2.2.3.2 CGA-N46 對肺癌細胞 A549 的作用28-29
• 2.2.3.3 CGA-N46 對雞胚成纖維細胞的作用29
• 2.2.3.4 CGA-N46 與氟康唑、特比萘芬體外聯(lián)合用藥對克柔念珠菌的抑制作用29-31
• 2.2.4 CGA-N46 對克柔念珠菌 DNA 的影響31-34
• 2.2.4.1 克柔念珠菌紫外吸收物的滲透檢測31
• 2.2.4.2 DNA-CGA-N46 凝膠阻滯實驗31-32
• 2.2.4.3 流式細胞儀檢測 CGA-N46 對克柔念珠菌細胞周期的影響32-33
• 2.2.4.4 CGA-N46 對 Taq DNA 聚合酶活性的影響33-34
• 2.2.5 CGA-N46 對克柔念珠菌蛋白合成的影響34-36
• 第三章 結(jié)果與分析36-51
• 3.1 CGA-N46 的分離純化結(jié)果36-37
• 3.2 CGA-N46 的穩(wěn)定性37-39
• 3.2.1 加熱溫度和加熱時間的影響37
• 3.2.2 凍融次數(shù)的影響37-38
• 3.2.3 室外放置時間的影響38
• 3.2.4 pH 的影響38-39
• 3.3 CGA-N46 對真核細胞的作用結(jié)果39-42
• 3.3.1 CGA-N46 的溶血作用39-40
• 3.3.2 CGA-N46 對肺癌細胞 A549 的作用40-41
• 3.3.3 CGA-N46 對雞胚成纖維細胞的作用41
• 3.3.4 CGA-N46 與氟康唑、特比萘芬體外聯(lián)合用藥對克柔念珠菌的抑制作用41-42
• 3.4 CGA-N46 對克柔念珠菌 DNA 的影響結(jié)果42-48
• 3.4.1 克柔念珠菌紫外吸收物的滲透檢測42-43
• 3.4.2 DNA-CGA-N46 凝膠阻滯實驗43-44
• 3.4.3 流式細胞儀檢測 CGA-N46 對克柔念珠菌細胞周期的影響44-47
• 3.4.4 CGA-N46 對 DNA 聚合酶的作用47-48
• 3.5 CGA-N46 對克柔念珠菌體蛋白的影響結(jié)果48-51
• 3.5.1 SDS-PAGE 電泳檢測 CGA-N46 作用后菌體蛋白變化48-51
• 第四章 討論51-54
• 4.1 CGA-N46 對真核細胞的作用51-52
• 4.2 CGA-N46 對克柔念珠菌 DNA 的作用52-54
• 第五章 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-62
• 致謝62-63
• 個人簡歷63

【參考文獻】

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本文編號：377330