本文關(guān)鍵詞：陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的錘頭狀核酶對(duì)Rab11C基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：陰道毛滴蟲（Trichomonas vaginalis, Donne1837）是寄生在人體陰道和泌尿道的鞭毛蟲，主要引起滴蟲性陰道炎和尿道炎。陰道毛滴蟲病是全球性最廣泛流行的非病毒性性轉(zhuǎn)播疾病之一，每年大約有1.7億人感染此病。盡管陰道毛滴蟲感染率較高，但是關(guān)于陰道毛滴蟲的致病機(jī)制、免疫原性、毒理等方面的報(bào)道較少。陰道毛滴蟲病毒（Trichomonas vaginalis virus，TVV）屬原蟲病毒，專性寄生于陰道毛滴蟲體內(nèi)。陰道毛滴蟲病毒與陰道毛滴蟲的致病性、毒力、抗藥性等有一定關(guān)系。 陰道毛滴蟲病毒載體的成功構(gòu)建使外源基因的導(dǎo)入得以實(shí)現(xiàn)，為蛋白質(zhì)功能研究提供了新方法。本課題組已利用iTRAQ技術(shù)，比較分析陰道毛滴蟲攜病毒株滋養(yǎng)體與無病毒株滋養(yǎng)體的差異蛋白，找到了差異蛋白R(shí)ab11C蛋白。Rab11是Ras小分子GTP酶超家族的成員，目前研究證實(shí)Ras GTP酶作為重要調(diào)節(jié)因子，調(diào)節(jié)對(duì)陰道毛滴蟲的致病過程中的形態(tài)變化起著至關(guān)重要的作用的G蛋白。 嵌合型錘頭狀核酶的構(gòu)建及其對(duì)Rab11C基因體外轉(zhuǎn)錄體切割本試驗(yàn)用肝浸湯培養(yǎng)基對(duì)陰道毛滴蟲攜病毒及無病毒株進(jìn)行體外純培養(yǎng)。將包含Rab11C的錘頭狀核酶插入到陰道毛滴蟲病毒載體中，構(gòu)建了陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的嵌合型錘頭狀核酶pNME/RL和pNME/RS。體外試驗(yàn)表明pNME/RL和pNME/RS體外轉(zhuǎn)錄體對(duì)Rab11C體外轉(zhuǎn)錄體起到有效切割，切割效率分別為82.12%和80.20%，而作為對(duì)照的pNME/RA對(duì)Rab11C基因體外轉(zhuǎn)錄體的切割效率僅為32.69%，為進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)提供了理論基礎(chǔ)。 核酶對(duì)Rab11C基因表達(dá)抑制及對(duì)陰道毛滴蟲病毒和蟲體本身的影響將錘頭狀核酶pNME/RL和pNME/RS經(jīng)電穿孔的方法轉(zhuǎn)染到陰道毛滴蟲體內(nèi)，熒光定量PCR檢測(cè)在體內(nèi)pNME/RL和pNME/RS對(duì)Rab11C基因切割效率分別可達(dá)到82%和73%。通過顯微鏡觀察及蟲體計(jì)數(shù)的方法檢測(cè)其對(duì)蟲體的影響，對(duì)蟲體計(jì)數(shù)顯示，陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體在轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染蟲體的數(shù)量少于對(duì)照組蟲體數(shù)，顯微鏡觀察顯示轉(zhuǎn)染后蟲體變形，活力減退，，表明Rab11C基因?qū)οx體的生長(zhǎng)、形態(tài)有一定影響。通過熒光定量PCR檢測(cè)其對(duì)陰道毛滴蟲病毒基因表達(dá)的影響，在轉(zhuǎn)染后21d內(nèi)，陰道毛滴蟲病毒表達(dá)量有所下調(diào)。 本試驗(yàn)成功構(gòu)建了陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的嵌合型錘頭狀核酶pNME/RL和pNME/RS，探討Rab11C基因?qū)﹃幍烂蜗x病毒以及蟲體本身的影響，為陰道毛滴蟲病毒載體在陰道毛滴蟲分子生物學(xué)等領(lǐng)域的研究奠定了基礎(chǔ)，為診斷及防治陰道毛滴蟲病提供了新的方向。
【關(guān)鍵詞】：陰道毛滴蟲 陰道毛滴蟲病毒 錘頭狀核酶 Rab11C基因
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R382.21;R3416
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 引言14-15
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述15-40
• 第1章 陰道毛滴蟲的研究進(jìn)展15-32
• 1.1 陰道毛滴蟲的進(jìn)化背景、生活史及形態(tài)特點(diǎn)15-16
• 1.2 陰道毛滴蟲病的流行病學(xué)及癥狀16-18
• 1.3 陰道毛滴蟲的致病機(jī)制18-19
• 1.4 陰道毛滴蟲的功能性基因19-23
• 1.5 陰道毛滴蟲的診斷23-28
• 1.6 陰道毛滴蟲病的防治28-32
• 第2章 陰道毛滴蟲病毒的研究進(jìn)展32-40
• 2.1 陰道毛滴蟲病毒32-37
• 2.2 基因轉(zhuǎn)染37-38
• 2.3 陰道毛滴蟲病毒載體38-40
• 第二篇 研究?jī)?nèi)容40-86
• 第1章 陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的嵌合型錘頭狀核酶的構(gòu)建40-58
• 1.1 材料與方法40-48
• 1.2 結(jié)果48-54
• 1.3 討論54-56
• 1.4 小結(jié)56-58
• 第2章 陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的嵌合型錘頭狀核酶對(duì) Rab11C基因體外切割58-66
• 2.1 材料與方法58-61
• 2.2 結(jié)果61-63
• 2.3 討論63-64
• 2.4 小結(jié)64-66
• 第3章 陰道毛滴蟲病毒載體介導(dǎo)的嵌合型錘頭狀核酶對(duì) Rab11C基因表達(dá)抑制66-76
• 3.1 材料與方法66-69
• 3.2 結(jié)果69-72
• 3.3 討論72-74
• 3.4 小結(jié)74-76
• 第4章 抑制 Rab11C基因表達(dá)對(duì)陰道毛滴蟲病毒及蟲體本身的影響76-86
• 4.1 材料與方法76-80
• 4.2 結(jié)果80-83
• 4.3 討論83-84
• 4.4 小結(jié)84-86
• 結(jié)論86-87
• 參考文獻(xiàn)87-107
• 攻讀碩士期間的科研成果107-109
• 導(dǎo)師及作者簡(jiǎn)介109-113
• 致謝113

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：376876