發(fā)布時間：2017-05-18 06:11

  本文關鍵詞：LIF對血管內皮祖細胞體外增殖和分化影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用體外細胞學對照實驗觀察LIF對體外血管內皮祖細胞（EPCs）的增殖和分化的影響；探索血管內皮祖細胞`在體外大規(guī)模擴增的新方法。 方法：在簽署知情同意書前提下，在無菌條件下在瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院婦產科正常剖宮產胎兒斷臍帶后經臍帶側取臍血約80ml。采用密度梯度分離法分離獲取臍血單個核細胞,將細胞密度調整為3×106/ml。體外液體培養(yǎng)體系分為兩類：一類為EGM-2完全培養(yǎng)基,設立為對照組，另一類為添加了LIF（10ng/ml）的EGM-2完全培養(yǎng)基,設立為實驗組。將分離臍血所獲的單個核細胞置于兩個培養(yǎng)板中分別加上述不同培養(yǎng)基，在37℃，5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。于培養(yǎng)第1、3、7、14日在倒置顯微鏡下觀察比較兩組細胞形態(tài)和生長情況，并行CD133表達的流式細胞檢測。于培養(yǎng)的第72、96、120、144、168h對兩組行MTT檢測,計算實驗組增殖率并繪制生長曲線。實驗所得計量資料以“均數(shù)士標準差”表示；組間比較采用t檢驗，以a=0.05為檢驗水準，當P0.05時統(tǒng)計學上有顯著意義；所有統(tǒng)計資料均由SPSS17.0統(tǒng)計完成。 結果：①臍血所獲的單個核細胞剛分離出來時細胞的形態(tài)呈大小相近的類圓形，其體積較小、折光度好，均勻分布.流式細胞檢測CD133的陽性表達率較低，僅占單個核細胞的0.9%。接種在纖維連接蛋白(FN)包被的培養(yǎng)板后3天內對照組和實驗組細胞開始貼壁生長，培養(yǎng)第3天可見部分細胞出現(xiàn)聚集形成細胞簇向集落雛形形成生長，實驗組細胞集落形成趨勢較對照組明顯；細胞體積逐漸增大，大小不等，逐漸由圓形變?yōu)槎趟笮�。原代培養(yǎng)的第7天細胞，鏡下可見兩組均有較快的細胞增殖，細胞體積較前明顯增大，細胞相互聚集，密度增大，數(shù)量增多；有較多的克隆集落形成，集落中央以圓形細胞群為主，圍繞圓形細胞周圍的是呈紡錘形放射狀排列的梭形細胞；實驗組細胞集落及細胞數(shù)量較對照組明顯占優(yōu)勢，而細胞體積與對照組相比則偏小。培養(yǎng)第14天，對照組細胞可達80%左右融合，中央細胞以多角形細胞為主，也有梭形細胞，呈鋪路石樣生長，細胞體積明顯偏大；實驗組90%左右融合，中間以橢圓形細胞和梭形細胞為主，外周多角形細胞不明顯。②培養(yǎng)第1、3、7、14天CD133的流式細胞檢測結果顯示:對照組CD133的表達表現(xiàn)為先升后降，培養(yǎng)7天表達最強，其下降幅度則較前上升幅度更為明顯；實驗組CD133的表達雖亦表現(xiàn)為先升后降，，但上升幅度較對照組快，下降幅度與對照組相比則明顯要慢。③MTT檢測結果顯示:兩組A490吸光度的差值隨培養(yǎng)時間的延長而逐漸增大，對照組EPCs所測得的A490(nm）的吸光度值較同時期實驗組小，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05)。實驗組細胞增殖率較對照組高。 結論： 在體外特定培養(yǎng)體系下，添加一定濃度的白血病抑制因子（10ng/ml)能促進臍血來源內皮祖細胞的增殖并抑制其分化。
【關鍵詞】：內皮祖細胞 白細胞抑制因子 增殖 分化
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-17
• 結果17-25
• 討論25-30
• 結論30-31
• 參考文獻31-34
• 英漢縮略詞對照表34-35
• 血管內皮祖細胞及與腫瘤的相關性（綜述）35-40
• 參考文獻38-40
• 致謝40-41
• 讀書期間發(fā)表文章41-42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前5條

1 劉建新;郝曉柯;王瑞安;王曉峰;馬岳云;蘇明權;劉家云;;白血病抑制因子對體外培養(yǎng)神經干細胞影響的試驗研究[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2010年11期

2 劉冉;蘭玲;于靜;;內皮祖細胞研究進展[J];中華實用診斷與治療雜志;2011年07期

3 趙政凱;劉暢;劉福強;高巍;任甫;劉力平;;飼養(yǎng)層細胞體系及白血病抑制因子對維持小鼠胚胎干細胞未分化狀態(tài)的作用[J];解剖科學進展;2009年03期

4 周秀娟;閆醒軍;何延政;劉勇;施森;江雋;;人外周血、臍血、脂肪組織來源的內皮祖細胞部分生物學特性比較[J];中國動脈硬化雜志;2011年08期

5 郁心;苗莉;繆競誠;;LIF基因修飾的ECV-304細胞對臍血造血細胞體外培養(yǎng)的影響[J];臨床檢驗雜志;2008年02期

  本文關鍵詞：LIF對血管內皮祖細胞體外增殖和分化影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：375261