本文關(guān)鍵詞：LIF對(duì)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞體外增殖和分化影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用體外細(xì)胞學(xué)對(duì)照實(shí)驗(yàn)觀察LIF對(duì)體外血管內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）的增殖和分化的影響；探索血管內(nèi)皮祖細(xì)胞`在體外大規(guī)模擴(kuò)增的新方法。 方法：在簽署知情同意書(shū)前提下，在無(wú)菌條件下在瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科正常剖宮產(chǎn)胎兒斷臍帶后經(jīng)臍帶側(cè)取臍血約80ml。采用密度梯度分離法分離獲取臍血單個(gè)核細(xì)胞,將細(xì)胞密度調(diào)整為3×106/ml。體外液體培養(yǎng)體系分為兩類：一類為EGM-2完全培養(yǎng)基,設(shè)立為對(duì)照組，另一類為添加了LIF（10ng/ml）的EGM-2完全培養(yǎng)基,設(shè)立為實(shí)驗(yàn)組。將分離臍血所獲的單個(gè)核細(xì)胞置于兩個(gè)培養(yǎng)板中分別加上述不同培養(yǎng)基，在37℃，5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。于培養(yǎng)第1、3、7、14日在倒置顯微鏡下觀察比較兩組細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況，并行CD133表達(dá)的流式細(xì)胞檢測(cè)。于培養(yǎng)的第72、96、120、144、168h對(duì)兩組行MTT檢測(cè),計(jì)算實(shí)驗(yàn)組增殖率并繪制生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)所得計(jì)量資料以“均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差”表示；組間比較采用t檢驗(yàn)，以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P0.05時(shí)統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著意義；所有統(tǒng)計(jì)資料均由SPSS17.0統(tǒng)計(jì)完成。 結(jié)果：①臍血所獲的單個(gè)核細(xì)胞剛分離出來(lái)時(shí)細(xì)胞的形態(tài)呈大小相近的類圓形，其體積較小、折光度好，均勻分布.流式細(xì)胞檢測(cè)CD133的陽(yáng)性表達(dá)率較低，僅占單個(gè)核細(xì)胞的0.9%。接種在纖維連接蛋白(FN)包被的培養(yǎng)板后3天內(nèi)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，培養(yǎng)第3天可見(jiàn)部分細(xì)胞出現(xiàn)聚集形成細(xì)胞簇向集落雛形形成生長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落形成趨勢(shì)較對(duì)照組明顯；細(xì)胞體積逐漸增大，大小不等，逐漸由圓形變?yōu)槎趟笮�。原代培養(yǎng)的第7天細(xì)胞，鏡下可見(jiàn)兩組均有較快的細(xì)胞增殖，細(xì)胞體積較前明顯增大，細(xì)胞相互聚集，密度增大，數(shù)量增多；有較多的克隆集落形成，集落中央以圓形細(xì)胞群為主，圍繞圓形細(xì)胞周?chē)氖浅始忓N形放射狀排列的梭形細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落及細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯占優(yōu)勢(shì)，而細(xì)胞體積與對(duì)照組相比則偏小。培養(yǎng)第14天，對(duì)照組細(xì)胞可達(dá)80%左右融合，中央細(xì)胞以多角形細(xì)胞為主，也有梭形細(xì)胞，呈鋪路石樣生長(zhǎng)，細(xì)胞體積明顯偏大；實(shí)驗(yàn)組90%左右融合，中間以橢圓形細(xì)胞和梭形細(xì)胞為主，外周多角形細(xì)胞不明顯。②培養(yǎng)第1、3、7、14天CD133的流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示:對(duì)照組CD133的表達(dá)表現(xiàn)為先升后降，培養(yǎng)7天表達(dá)最強(qiáng)，其下降幅度則較前上升幅度更為明顯；實(shí)驗(yàn)組CD133的表達(dá)雖亦表現(xiàn)為先升后降，，但上升幅度較對(duì)照組快，下降幅度與對(duì)照組相比則明顯要慢。③MTT檢測(cè)結(jié)果顯示:兩組A490吸光度的差值隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大，對(duì)照組EPCs所測(cè)得的A490(nm）的吸光度值較同時(shí)期實(shí)驗(yàn)組小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率較對(duì)照組高。 結(jié)論： 在體外特定培養(yǎng)體系下，添加一定濃度的白血病抑制因子（10ng/ml)能促進(jìn)臍血來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖并抑制其分化。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮祖細(xì)胞 白細(xì)胞抑制因子 增殖 分化
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-25
• 討論25-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 英漢縮略詞對(duì)照表34-35
• 血管內(nèi)皮祖細(xì)胞及與腫瘤的相關(guān)性（綜述）35-40
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 致謝40-41
• 讀書(shū)期間發(fā)表文章41-42

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 劉建新;郝曉柯;王瑞安;王曉峰;馬岳云;蘇明權(quán);劉家云;;白血病抑制因子對(duì)體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞影響的試驗(yàn)研究[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2010年11期

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  本文關(guān)鍵詞：LIF對(duì)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞體外增殖和分化影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：375261