本文關(guān)鍵詞：酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞自噬及其與P62作用的關(guān)系，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 采用不同濃度酒精作用于大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12細(xì)胞)，觀察細(xì)胞自噬發(fā)生及其與P62變化的關(guān)系。 方法 用四甲偶氮唑鹽比色法(MTT)觀察酒精對PC12細(xì)胞生存率的影響；間接免疫熒光法檢測細(xì)胞自噬標(biāo)志性蛋白LC3和P62的變化；高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞LC3熒光強度；透射電鏡檢測細(xì)胞自噬的超微結(jié)構(gòu)；Western blotting方法檢測P62蛋白量的表達(dá)。 結(jié)果 100mmol/L、200mmol/L、400mmol/L和800mmol/L濃度酒精處理PC12細(xì)胞24h，與0mmol/L酒精組比較，PC12細(xì)胞生存率分別為91.97%(P＜0.05)、72.63%(P＜0.01)、58.23%(P＜0.01)、50.82%(P＜0.01)，酒精對PC12細(xì)胞的增殖有顯著的抑制作用，呈濃度依賴性。間接免疫熒光檢測到酒精致PC12細(xì)胞自噬標(biāo)志性蛋白LC3在細(xì)胞核周圍密度增高，并與P62形成點狀聚集共定位；高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測到酒精濃度為200mmol/L作用2h時，PC12細(xì)胞LC3自噬熒光強度最高；透射電鏡也觀察到酒精作用的PC12細(xì)胞質(zhì)中自噬體和自噬溶酶體。Western blotting結(jié)果顯示，不同濃度酒精處理PC12細(xì)胞2h，P62蛋白表達(dá)量顯著增加(P＜0.01)；用200mmol/L濃度酒精處理PC12細(xì)胞，，P62蛋白表達(dá)在2h達(dá)到最高值。 結(jié)論 酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的發(fā)生自噬現(xiàn)象，P62蛋白參與此自噬調(diào)控過程。
【關(guān)鍵詞】：酒精 自噬 P62 LC3 PC12細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目錄7-9
• 引言9-13
• 1 實驗材料、試劑和儀器13-17
• 1.1 細(xì)胞株13
• 1.2 儀器和產(chǎn)地13-14
• 1.3 主要試劑14
• 1.4 主要試劑配置方法14-17
• 2 實驗方法17-21
• 2.1 MTT 比色法檢測細(xì)胞生存率17
• 2.2 間接免疫熒光檢測 LC3 在 PC12 細(xì)胞的表達(dá)及定位17
• 2.3 高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測 LC3 熒光強度17-18
• 2.4 透射電鏡觀察自噬體和自噬溶酶體形態(tài)學(xué)特征18
• 2.5 Western blotting 檢測 P62 蛋白表達(dá)量18-20
• 2.5.1 蛋白樣品的制備和定量18-19
• 2.5.2 SDS-PAGE 及轉(zhuǎn)移電泳19-20
• 2.5.3 抗體雜交和發(fā)光檢測20
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)方法20-21
• 3 結(jié)果21-27
• 3.1 酒精對 PC12 細(xì)胞生存率的影響21-22
• 3.2 酒精對 PC12 細(xì)胞 LC3 的影響22
• 3.3 酒精對 PC12 細(xì)胞 LC3 熒光強度的影響22-23
• 3.4 自噬體和自噬溶酶體的超微結(jié)構(gòu)23-24
• 3.5 PC12 細(xì)胞中 P62 與 LC3 的共定位24
• 3.6 酒精對 PC12 細(xì)胞 P62 蛋白表達(dá)的影響24-27
• 4 討論27-29
• 5 結(jié)論29-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 文獻(xiàn)綜述35-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 附錄 英文縮略詞表47-48
• 致謝48-49

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：375270