目的構建一種合并高血脂和誘導型高血壓的小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技術,采用同源重組的方式,將一段由TetOn操控并以高斯熒光素酶作為報告基因的血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)過表達序列替換內源性載脂蛋白E(ApoE)的編碼區(qū),從而抑制ApoE基因表達,獲得轉基因小鼠ApoE^A/A。通過熒光定量PCR檢測小鼠ApoE基因的表達情況;通過飲用水添加強力霉素(doxycycline,Dox),誘導小鼠體內產生Ang Ⅱ;并通過監(jiān)測小鼠血液中高斯熒光素酶活性指示小鼠體內Ang Ⅱ表達情況,同時采用無創(chuàng)鼠尾尾套法監(jiān)測小鼠血壓;利用全自動生化分析儀測定小鼠血漿中血脂的含量。結果 ApoE^A/A小鼠中ApoE基因為全身缺陷;強力霉素能誘導ApoE^A/A小鼠體內持續(xù)產生Ang Ⅱ,繼而引發(fā)小鼠發(fā)生高血壓;給予強力霉素處理并不影響ApoE^A/A小鼠血脂含量。結論成功構建了一種高脂血癥和誘導型高血壓的小鼠模型,可應用于高血壓、高血脂,特別是合并雙因素的相關疾病機制與干預效果的研究。

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【文章目錄】：
1 材料及方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 實驗動物
    1.3 小鼠基因型鑒定
    1.4 qRT-PCR檢測Apo E基因的轉錄水平
    1.5 高斯熒光素酶活性檢測
    1.6 小鼠高血壓造模
    1.7 小鼠血壓檢測
    1.8 血脂檢測
    1.9 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 轉基因小鼠的構建
    2.2 Apo EA/A小鼠基因型鑒定
    2.3 Apo E基因m RNA表達鑒定
    2.4 高斯熒光素酶及血壓的檢測
    2.5 血脂的檢測
3 討論



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