本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌酯酶的表達(dá)、純化、結(jié)晶及理化特性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核分枝桿菌作為結(jié)核傳染病的病原微生物,很早就引起了人們的關(guān)注,并對其進(jìn)行過大量的研究。隨著耐藥結(jié)核桿菌突變株的出現(xiàn),結(jié)核桿菌對絕大多數(shù)常規(guī)治療藥物都出現(xiàn)了不同程度的耐藥性,致使結(jié)核病在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)回升趨勢,我國每年新發(fā)肺結(jié)核病人145萬人,結(jié)核病已成為我國傳染性疾病中的第一號(hào)殺手。通過研究發(fā)現(xiàn),結(jié)核分枝桿菌的致病性和耐受性都與其較高的酯類物質(zhì)含量密切相關(guān)。而酯類的代謝主要由酯酶進(jìn)行調(diào)控。所以研究此酯酶的結(jié)構(gòu)和功能有助于更好了解結(jié)核分枝桿菌在致病中的作用,并針對性的研發(fā)新一代的結(jié)核病治療藥物。本文研究的酯酶基因(Esterase) rv3036c來源于結(jié)核分枝桿菌H37Rv,是其酯酶中的一種,。由于結(jié)構(gòu)等相關(guān)數(shù)據(jù)的缺乏,使得對于Rv3036c在結(jié)核分枝桿菌酯代謝中的作用與功能尚不清楚。本研究工作主要包括rv3036c基因重組載體構(gòu)建、Rv3036c蛋白的表達(dá)純化、蛋白結(jié)晶以及理化特性研究。rv3036c基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中,誘導(dǎo)重組Rv3036c蛋白的大量表達(dá),經(jīng)過Ni-NTA親和層析、DEAE離子交換層析、Superdex 75凝膠過濾層析等純化技術(shù),得到99%以上純度的目的蛋白,SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示其分子量為25.5KD。應(yīng)用分光光度法驗(yàn)證了其具有酯酶活性。采用氣相擴(kuò)散懸滴法對Rv3036c的結(jié)晶條件進(jìn)行了篩選與優(yōu)化,最終在一個(gè)結(jié)晶條件下獲得了適合X-射線衍射的單晶。本研究建立了酯酶表達(dá)純化、蛋白結(jié)晶及酯酶測定的有效方法,從而為下一步抗結(jié)核分枝桿菌藥物設(shè)計(jì)與開發(fā)提供參考依據(jù),具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 酯酶 Rv3036c 蛋白質(zhì)結(jié)晶 X射線衍射 理化特性研究
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 英文縮略語10-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-20
• 1.1 結(jié)核分枝桿菌11-14
• 1.1.1 生物學(xué)性狀11-12
• 1.1.2 致病性12-14
• 1.2 結(jié)核病相關(guān)疾病的防治與耐藥性現(xiàn)狀的研究14-16
• 1.2.1 結(jié)核病防治與現(xiàn)狀14-15
• 1.2.2 結(jié)核桿菌耐藥機(jī)制的研究15-16
• 1.3 酯酶性質(zhì)的概述16
• 1.4 酯酶蛋白的功能機(jī)制16-19
• 1.5 結(jié)核桿菌及其酯酶的研究現(xiàn)狀19
• 1.6 本課題研究的意義與研究內(nèi)容19-20
• 1.7 論文各部分的主要內(nèi)容20
• 第二章 結(jié)核分枝桿菌酯酶Rv3036c生物信息學(xué)分析20-25
• 2.1 引言20-21
• 2.2 方法21-22
• 2.2.1 基本理化性質(zhì)分析21
• 2.2.2 信號(hào)肽預(yù)測21
• 2.2.3 跨膜區(qū)預(yù)測21
• 2.2.4 同源性分析21-22
• 2.2.5 結(jié)構(gòu)域分析22
• 2.3 Rv3036c生物信息學(xué)分析結(jié)果22-25
• 2.3.1 Rv3036c基本理化性質(zhì)分析22-23
• 2.3.2 Rv3036c信號(hào)肽預(yù)測23
• 2.3.3 Rv3036c跨膜區(qū)預(yù)測23
• 2.3.4 Rv3036c同源性分析23-25
• 2.3.5 Rv3036c結(jié)構(gòu)域分析25
• 2.4、結(jié)論25
• 第三章 結(jié)核分枝桿菌酯酶Rv3036c的表達(dá)、純化、結(jié)晶25-48
• 3.1、引言25-30
• 3.1.1 基因的克隆與表達(dá)26
• 3.1.2 蛋白的分離與純化26-28
• 3.1.3 蛋白的結(jié)晶28-30
• 3.2 試驗(yàn)材料30-31
• 3.3 試驗(yàn)方法31-41
• 3.3.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建31-37
• 3.3.2 轉(zhuǎn)化宿主蛋白的表達(dá)37-38
• 3.3.3 融合蛋白的純化38-40
• 3.3.4 蛋白結(jié)晶40-41
• 3.4 試驗(yàn)結(jié)果41-48
• 3.4.1 Rv3036c重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定41-42
• 3.4.2 Rv3036c的表達(dá)42
• 3.4.3 Rv3036c的純化42-45
• 3.4.4 Rv3036c的蛋白結(jié)晶45-48
• 3.5 結(jié)論48
• 第四章 結(jié)核分枝桿菌酯酶Rv3036c的理化特性分析48-54
• 4.1 引言48-49
• 4.1.1 質(zhì)譜分析49
• 4.1.2 圓二色譜分析49
• 4.2 試驗(yàn)材料49
• 4.2.1 試劑和耗材49
• 4.2.2 儀器49
• 4.3 試驗(yàn)方法49-50
• 4.3.1 質(zhì)譜分析49-50
• 4.3.2 圓二色譜分析50
• 4.3.3 酯酶活性分析50
• 4.4 試驗(yàn)結(jié)果50-54
• 4.4.1 質(zhì)譜分析50-51
• 4.4.2 圓二色譜分析51-52
• 4.4.3 酶活性分析52-54
• 4.5 結(jié)論54
• 第五章 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 于水;鄒曉穎;趙法;楊陟華;王勇;楊國山;朱茂祥;;貧鈾氣溶膠的理化特性研究[J];中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志;2003年05期

2 鐘延強(qiáng),張國慶,吳誠,郭志強(qiáng),魯瑩,單磊;鹽酸布比卡因人血清白蛋白微球的制備工藝及其理化特性研究[J];中國藥學(xué)雜志;2004年06期

3 ;[J];;年期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黨光輝;結(jié)核分枝桿菌酯酶的表達(dá)、純化、結(jié)晶及理化特性研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

2 夏海洋;農(nóng)抗A_（9901）-Ⅰ素分離鑒定及生物理化特性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌酯酶的表達(dá)、純化、結(jié)晶及理化特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：373890