目的： 了解不同濃度胰島素對擬胚體（embryoid body, EB）神經系統(tǒng)發(fā)育相關基因時序性表達的影響。方法： 采用小鼠EB為研究對象,體外培養(yǎng)模擬胚胎早期發(fā)育,以60pM及6nM胰島素進行干預,并分別于培養(yǎng)的第1、3、5、7、9、11天收集EB細胞；利用實時熒光定量PCR技術檢測神經系統(tǒng)相關基因Sox2、Fgf5、 Pax6、Arx的時序性表達。 結果： 1.從形態(tài)學看,60pM組EB狀態(tài)優(yōu)于6nM組；60pM組EB第5天開始出現(xiàn)囊腔化趨勢,第7天形成囊化腔；6nM組EB第7天才開始出現(xiàn)囊腔化趨勢,且在整個實驗過程中一直沒形成囊化腔； 2.6nM胰島素組EB的Sox2、Fgf5、Pax6、Arx的表達量均明顯高于60pM組EB； 3.Sox2基因表達在2組EB第5天達到高峰,第11天同時降至最低； 4.Fgf5基因在2組EB前5天的表達量都很低,隨后出現(xiàn)表達增加,60pM組第7天到達高峰,6nM組第7天明顯升高,第9天到高峰,至11天2組表達同時下降至同一水平； 5.Pax6基因在6nM組中從第3天開始上升,第7天到達高峰,11天下調至最低水平,而在60pM組中... 

【文章頁數】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 第1章 緒論 第2章 實驗材料與方法
2.1 實驗材料
    2.1.1 細胞系
    2.1.2 耗材
    2.1.3 試劑
    2.1.4 主要儀器
    2.1.5 培養(yǎng)基的配置
2.2 實驗方法
    2.2.1 小鼠MEF細胞的培養(yǎng)
    2.2.2 制備飼養(yǎng)層細胞
    2.2.3 小鼠ES細胞的復蘇及培養(yǎng)
    2.2.4 小鼠EB的形成、培養(yǎng)及胰島素干預
    2.2.5 采用實時熒光定量PCR技術檢測各組EB的基因表達差異 第3章 結果
3.1 擬胚體的生長形態(tài)
3.2 RNA電泳圖
3.3 Real-timePCR檢測結果
    3.3.1 標準曲線及產物溶解曲線
    3.3.2 實時擴增曲線圖
    3.3.3 各樣品目的基因相對定量結果
    3.3.4 各樣品目的基因相對定量表達趨勢圖及結果分析 第4章 討論
4.1 不同濃度胰島素對Sox2表達的影響
4.2 不同濃度胰島素對Fgf5表達的影響
4.3 不同濃度胰島素對Pax6表達的影響
4.4 不同濃度胰島素對Arx表達的影響
4.5 DNA甲基化與神經系統(tǒng)相關基因表達的關系 第5章 結論 參考文獻 綜述
參考文獻 攻讀學位期間主要的研究成果 致謝


【參考文獻】：
碩士論文
[1]胰島素對擬胚體多能性和分化相關標志基因啟動子區(qū)域甲基化的影響[D]. 朱艷.中南大學 2012



本文編號：3729964