本文關鍵詞：表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯對脂多糖刺激小鼠巨噬細胞表達細胞因子和趨化因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：炎癥是臨床常見的一種病理生理過程，與多種疾病的發(fā)生和惡化有關。在炎癥反應期間，由組織內(nèi)的細胞表達分泌的細胞因子、趨化因子等進一步地募集嗜中性粒細胞、單核細胞等免疫反應細胞進入創(chuàng)傷部位參與炎癥反應，它們對炎癥反應的發(fā)生、發(fā)展起到了重要的調(diào)節(jié)作用。 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是綠茶多酚重要的有效活性成分，具有抗炎癥、抗氧化、抗輻射、抗衰老、誘導腫瘤細胞周期停滯和啟動腫瘤細胞凋亡等多種生物學作用。本實驗室先前的研究表明，EGCG能夠抑制皮膚傷口愈合期間白細胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、腫瘤壞死因子-(tumor necrosis factor-TNF-)、單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(metalloproteinase-1, MMP-1)和巨噬細胞炎癥蛋白-2(macrophage inflammatoryprotein-2, MIP-2)的基因表達，降低組織IL-1、TNF-、MCP-1、MIP-2和MMP-1的水平，促進基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1)基因的表達。 本論文以小鼠巨噬細胞RAW264.7為實驗材料，利用MTT法檢測EGCG對RAW264.7細胞增殖的影響，實時熒光定量PCR和ELISA法研究EGCG對脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7促炎癥細胞因子TNF-、IL-1和趨化因子MCP-1、MIP-2基因表達及其生成的影響。實驗結(jié)果顯示，1μg/mL LPS處理24h對小鼠巨噬細胞RAW264.7增殖沒有影響，0~100μmol/L EGCG處理24h對RAW264.7細胞的增殖也沒有影響。1μg/mL LPS可刺激RAW264.7細胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2的基因表達與分泌，而EGCG對LPS刺激的RAW264.7細胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2基因水平和蛋白水平均有抑制效應，并呈劑量依賴性，50μmol/L EGCG的抑制作用最強，，提示EGCG能顯著抑制LPS刺激巨噬細胞誘導的炎癥反應。
【關鍵詞】：炎癥反應 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯 腫瘤壞死因子- 白細胞介素-1 單核細胞趨化蛋白-1 巨噬細胞炎性蛋白-2 巨噬細胞
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 縮略詞表6-10
• 文獻綜述10-22
• 1 炎癥反應10-15
• 1.1 炎癥反應的發(fā)生過程10-11
• 1.2 與炎癥反應有關的細胞因子、趨化因子11-14
• 1.3 脂多糖誘導炎癥反應的機理和過程14-15
• 2 巨噬細胞在炎癥反應過程中的作用15-16
• 3 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯16-22
• 3.1 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯簡介16-17
• 3.2 表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯抗炎機理的研究17-22
• 第一章 引言22-24
• 第二章 材料和方法24-38
• 2.1 實驗材料24-28
• 2.1.1 實驗細胞24
• 2.1.2 主要試劑24-25
• 2.1.3 主要儀器設備25-26
• 2.1.4 試劑的配制26-28
• 2.2 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)28
• 2.2.1 RAW264.7 細胞的培養(yǎng)與傳代28
• 2.2.2 RAW264.7 細胞的凍存與復蘇28
• 2.3 MTT 法檢測細胞增殖28-29
• 2.3.1 實驗設計28-29
• 2.3.2 EGCG 和 LPS 對 RAW264.7 細胞增值影響的測定29
• 2.4 實時熒光定量 PCR29-34
• 2.4.1 實驗設計29
• 2.4.2 實驗用品的 RNase-free 處理29-30
• 2.4.3 RNA 提取30-31
• 2.4.4 RNA 完整性檢測31
• 2.4.5 RNA 濃度和純度檢測31-32
• 2.4.6 RNA 的保存32
• 2.4.7 逆轉(zhuǎn)錄反應32
• 2.4.8 試劑的分裝32-33
• 2.4.9 實驗所用引物33
• 2.4.10 PCR 操作步驟33-34
• 2.5 ELISA 法檢測34-38
• 2.5.1 實驗設計34-35
• 2.5.2 ELISA 檢測前準備工作35
• 2.5.3 ELISA 檢測操作步驟35-36
• 2.5.4 結(jié)果計算36-38
• 第三章 結(jié)果38-50
• 3.1 MTT 法實驗結(jié)果38-40
• 3.1.1 LPS 對 RAW264.7 細胞增殖的影響38-39
• 3.1.2 EGCG 對 RAW264.7 細胞增殖的影響39-40
• 3.2 RNA 質(zhì)量檢測40-41
• 3.3 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 TNF- 基因表達的影響41-42
• 3.4 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 TNF- 生成的影響42-43
• 3.5 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 IL-1 基因表達的影響43-44
• 3.6 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 IL-1 生成的影響44-45
• 3.7 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 MCP-1 基因表達的影響45-46
• 3.8 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 MCP-1 生成的影響46-47
• 3.9 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 MIP-2 基因表達的影響47-48
• 3.10 EGCG 對 LPS 刺激 RAW264.7 細胞 MIP-2 生成的影響48-50
• 第四章 討論50-54
• 4.1 發(fā)生炎癥反應過程中 TNF- 、IL-1 、MCP-1 和 MIP-2 基因的表達分析50-51
• 4.2 EGCG 對 TNF- 、IL-1 、MCP-1、MIP-2 分泌和基因表達的影響51-54
• 第五章 結(jié)論54-56
• 參考文獻56-62
• 致謝62-64
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄64-65

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯對脂多糖刺激小鼠巨噬細胞表達細胞因子和趨化因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：372362