目的 通過慢病毒包裝系統(tǒng)感染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,建立能夠穩(wěn)定、高效表達(dá)microRNA-23b（miR-23b）的細(xì)胞株miR23b-BMSCs。方法 從C57BL/6小鼠股骨及脛骨分離出來的原代BMSCs,經(jīng)過多次傳代培養(yǎng),依然能保持干細(xì)胞特有的螺旋生長狀態(tài)以及自我更新的潛能。利用帶有pre-miR23b基因的質(zhì)粒pEZX-MR03與pMDLg/pRRE、pRSV Rev、pLP/VSVG進(jìn)行慢病毒包裝,收集病毒液感染BMSCs,顯微鏡下觀察帶有eGFP熒光標(biāo)記的間充質(zhì)干細(xì)胞,利用嘌呤霉素（2.5 μg/mL）進(jìn)行藥篩。結(jié)果 成功篩選出穩(wěn)定表達(dá)miR-23b的BMSCs,提取干細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄、實時熒光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR）進(jìn)行表達(dá)鑒定。qPCR結(jié)果顯示,過表達(dá)BMSCs組miR-23b的表達(dá)量較對照組BMSCs提高100倍（t＝4.572,P＆lt;0.05）。結(jié)論 利用慢病毒包裝可以成功地將miR-23b整合到干... 

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]哮喘中miR-155的表達(dá)變化及其對Th細(xì)胞分化的影響[J]. 劉希君,沈亞琪,秦虹,胡瑞雪,王廣友,李呼倫.  國際免疫學(xué)雜志. 2018 (04)



本文編號：3714869