前言 人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2/neu）是表皮生長(zhǎng)因子受體家族的第二號(hào)成員,是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜受體蛋白,在25%～30%的乳腺癌中過(guò)表達(dá),在正常組織中低表達(dá),是良好的腫瘤免疫生物治療的靶分子。但HER2屬自身蛋白,機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)于過(guò)表達(dá)的自身蛋白往往處于耐受狀態(tài),此外腫瘤細(xì)胞在長(zhǎng)期發(fā)展過(guò)程中在腫瘤局部形成了一個(gè)深度免疫抑制微環(huán)境,免疫細(xì)胞的作用在這個(gè)微環(huán)境中受到抑制。打破機(jī)體對(duì)腫瘤相關(guān)抗原的耐受、解除腫瘤局部的抑制狀態(tài)、誘發(fā)有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)是腫瘤免疫治療的關(guān)鍵。 目的 探討異種抗原蛋白neu-Fc聯(lián)合hGM-CSF和BCG的免疫調(diào)節(jié)作用;探討異種抗原蛋白neu-Fc聯(lián)合IFN-γ和BCG產(chǎn)生的抗腫瘤免疫效應(yīng)。 方法 通過(guò)基因工程技術(shù)將大鼠neu L2-S2功能域與人IgG Fc區(qū)編碼序列融合,構(gòu)建真核表達(dá)載體;在CHO細(xì)胞中獲得穩(wěn)定表達(dá),應(yīng)用rProtein A Sepharose Fast Flow親和層析純化neu-Fc融合蛋白,應(yīng)用SDS... 

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一部分 異種抗原NEU-FC 聯(lián)合HGM-CSF 和BCG 的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)
    1 前言
    2 材料
        2.1 主要試劑
        2.2 主要溶液的配制
        2.3 主要儀器設(shè)備
    3 方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 PBMC 的分離與培養(yǎng)
        3.3 NEU-FC 的構(gòu)建、表達(dá)及純化
        3.4 NEU-FC 的鑒定
            3.4.1 SDS-PAGE 測(cè)定Neu-Fc 的分子量
            3.4.2 Western Blot 鑒定
        3.5 細(xì)胞增殖活性測(cè)定（MTT）
        3.6 細(xì)胞因子檢測(cè)（ELISA）
        3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 MCF-7 細(xì)胞上清抑制PBMC 分泌IL-12 及刺激PBMC 分泌IL-10
        4.2 GM-CSF 和BCG 對(duì)PBMC 的刺激作用
        4.3 NEU-FC 的表達(dá)、純化及促增殖作用分析
        4.4 NEU-FC、GM-CSF、BCG 聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞因子分泌的影響
    5 討論
    6 參考文獻(xiàn)
第二部分 NEU-FC 聯(lián)合IFN-Γ和BCG 的協(xié)同抗腫瘤作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 NEU-FC 的構(gòu)建以及表達(dá)、純化和鑒定
        2.3 PBMC 和單核細(xì)胞的分離
        2.4 流式細(xì)胞分析
        2.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)( MTT )
        2.6 細(xì)胞因子分析
        2.7 殺傷實(shí)驗(yàn)（LDH 法）
            2.7.1 效應(yīng)細(xì)胞的處理
            2.7.2 靶細(xì)胞的處理
            2.7.3 效靶作用
        2.8 穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.9 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
            2.9.1 第一批動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
            2.9.2 第二批動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 MCF-7 上清抑制PBMC 分泌IL-12 及刺激PBMC 分泌IL-10
        3.2 NEU-FC 和IFN-Γ可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫細(xì)胞的影響
        3.3 BCG 能夠顯著提高TH1 類反應(yīng)
        3.4 NEU-FC 和BCG、IFN-Γ聯(lián)合誘導(dǎo)逆轉(zhuǎn)單核細(xì)胞表型變化
        3.5 IFN-Γ上調(diào)T47D,、MCF-7 和MCF-7
        3.6 T47D、MCF-7 和MCF-7/HER2 細(xì)胞表面HER2 表達(dá)水平不同
        3.7 NEU-FC, IFN-Γ和BCG 誘導(dǎo)的特異性抗腫瘤應(yīng)答
        3.8 EMT6/HER2 細(xì)胞株的建立
        3.9 NEU-FC、IFN-Γ和BCG 聯(lián)合應(yīng)用可抑制腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)
    4 討論
    5 參考文獻(xiàn)
第三部分 小結(jié)
第四部分 文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
主要縮略語(yǔ)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HER2/neu和GM-CSF共轉(zhuǎn)染樹(shù)突狀細(xì)胞的免疫殺傷研究[J]. 唐三元,黃衛(wèi)國(guó),伍尤華,戴文香,江青山.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2008(01)
[2]乳腺與乳腺癌[J]. 周雪瑞,黃選東.  生物學(xué)通報(bào). 2004(07)
[3]酪氨酸激酶受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑與腫瘤治療[J]. 朱孝峰,劉宗潮,曾益新.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2002(03)



本文編號(hào)：3714996