目的評價結(jié)核分枝桿菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的細胞表位融合蛋白的免疫原性,為研制新型多階段結(jié)核疫苗提供可靠的靶抗原。方法將Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的細胞表位串聯(lián)構(gòu)成融合抗原基因（命名為msv）,克隆到原核表達載體pEASY-Blunt E1中,誘導表達后采用親和層析純化表達產(chǎn)物,經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定后,用純化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法檢測免疫小鼠的特異性抗體滴度;分離免疫小鼠的脾淋巴細胞,采用淋巴細胞增殖法檢測其免疫原性。結(jié)果成功構(gòu)建了能表達融合抗原基因msv的原核表達質(zhì)粒;SDS-PAGE和Western blot結(jié)果表明,表達產(chǎn)物親和層析純化后,獲得相對分子質(zhì)量為41.3×10~3的目的蛋白;ELISA檢測免疫小鼠血清抗體滴度,結(jié)果表明特異性抗體效價約為1∶81 920;淋巴細胞增殖實驗結(jié)果表明,抗原致敏的淋巴細胞經(jīng)融合蛋白msv刺激后明顯增殖。結(jié)論成功表達并純化出融合蛋白msv,該融合蛋白可誘導小鼠特異性抗體表達和刺激細胞免疫應(yīng)答,可作為結(jié)核疫苗的抗原組分。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 實驗動物
    1.2 方法
        1.2.1 結(jié)核分枝桿菌融合基因msv的合成
        1.2.2 融合抗原基因msv的擴增
        1.2.3 融合抗原基因msv原核表達載體的構(gòu)建
        1.2.4 重組蛋白的誘導表達、鑒定及純化
        1.2.5 動物免疫
        1.2.6 免疫小鼠抗體水平檢測
        1.2.7 淋巴細胞增殖實驗
        1.2.8 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 融合蛋白的表達與純化
    2.3 免疫小鼠血清特異性抗體滴度
    2.4 免疫小鼠抗原特異性淋巴細胞增殖
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3704955