本文論述了構(gòu)建非免疫性人抗體Fab片段噬菌體文庫的方法。 我們從健康人外周血淋巴細(xì)胞中提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA后用重鏈Fd片段和輕鏈的特異性5′和3′端引物分別PCR擴(kuò)增抗體重鏈Fd基因和輕鏈基因。用SacⅠ和XbaⅠ酶切輕鏈PCR產(chǎn)物和噬粒載體pComb3，凝膠回收酶切產(chǎn)物，通過T4 DNA連接酶將輕鏈基因片段克隆到pComb3載體上，電穿孔轉(zhuǎn)染大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞XL1-Blue，構(gòu)建輕鏈庫。搖菌擴(kuò)增后提取質(zhì)粒DNA，用XhoⅠ和SpeⅠ酶切，同時(shí)用相同的酶酶切重鏈Fd段PCR產(chǎn)物，用T4 DNA連接酶連接重鏈Fd基因和質(zhì)粒DNA，電穿孔轉(zhuǎn)染大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞XL1-Blue，搖菌擴(kuò)增后提取質(zhì)粒DNA，-70℃凍存留待以后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌，制備抗體庫進(jìn)行抗原篩選。 本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建噬菌體抗體文庫，希望為今后本研究室的后續(xù)研究提供技術(shù)及物質(zhì)支持。 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略語表
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
致謝
文獻(xiàn)綜述
附錄



本文編號(hào)：3677405