本文關(guān)鍵詞：旋毛蟲與肝癌H7402相關(guān)抗原蛋白的單克隆抗體制備及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：旋毛蟲（Trichinella speralis）是一種毛形科毛形屬寄生蟲，對人畜皆有感染能力。根據(jù)現(xiàn)有的研究資料表明，旋毛蟲對部分腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制和干擾作用，能夠降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。肝癌被認(rèn)定為世界健康一大殺手，發(fā)病率及死亡率居高不下，其危險性不容小覷。但是，肝癌疫苗及傳統(tǒng)抗肝癌藥物并不能良好的發(fā)揮作用，，因此，探尋高效、低毒、副作用少的生物制劑成為人們對抗肝癌的迫切需求�，F(xiàn)已有研究證明旋毛蟲蟲體蛋白與肝癌H7402細(xì)胞間存在交叉抗原；本實驗室利用免疫篩選得到的旋毛蟲與肝癌H7402相關(guān)的CK-1基因制備了單克隆抗體，其在體內(nèi)和體外實驗中均發(fā)現(xiàn)能夠抑制肝癌H7402細(xì)胞的生長。由此可見，旋毛蟲體內(nèi)可能含有或分泌抗癌物質(zhì)。故而，本實驗擬通過表達(dá)文庫篩選法尋找其他旋毛蟲與肝癌H7402細(xì)胞之間的相關(guān)抗原，并利用制備的單克隆抗體來觀測其抑制腫瘤細(xì)胞生長的效果，從而為日后探索肝癌的生物治療方法和旋毛蟲抑制腫瘤的效果提供信息。 本實驗在已建立的旋毛蟲cDNA表達(dá)文庫的基礎(chǔ)上，利用免疫篩選的方法獲得了與肝癌H7402細(xì)胞具有免疫反應(yīng)的6種相關(guān)抗原基因，分別為半胱氨酸線性蛋白（Tsp_06120）、高爾基體聯(lián)合植物相關(guān)致病蛋白（Tsp_07885）、硒蛋白T（Tsp_03801）、DNA剪切修復(fù)蛋白ERCC-1（Tsp_01641）、脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶作用蛋白（Tsp_01476）和核糖氧化還原蛋白（Tsp_04425）。通過生物學(xué)分析后，后續(xù)試驗選擇硒蛋白T基因進(jìn)行原核表達(dá)和純化。在硒蛋白T單克隆抗體的制備中，我們共得到3株單克隆細(xì)胞記為4F1，4H2和4D4。經(jīng)抗體亞類鑒定、核型分析和效價檢測后，4H2為IgG2b亞類，染色體數(shù)目104，腹水效價，大于1×105。隨后，用4H2抗體進(jìn)行了體內(nèi)和體外的腫瘤抑制實驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在體外MTT實驗中，當(dāng)單克隆抗體含量為50μg/100μL時，對肝癌H7402細(xì)胞的生長抑制率為26.7%；在動物模型實驗中，當(dāng)單克隆抗體含量為100μg/100μL時，對腫瘤的抑制率為80.3%。
【關(guān)鍵詞】：旋毛蟲 硒蛋白T 單克隆抗體 體內(nèi)外抑制試驗
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R735.7;R392
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫詞注釋表8-9
• 引言9-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-16
• 第1章 旋毛蟲抗腫瘤的相關(guān)研究進(jìn)展10-13
• 第2章 肝癌治療方法的研究進(jìn)展13-16
• 第二篇 實驗內(nèi)容16-43
• 第1章 旋毛蟲與肝癌 H7402 細(xì)胞相關(guān)抗原基因的篩選和鑒定16-23
• 1.1 材料與方法16-19
• 1.2 結(jié)果19-21
• 1.3 討論21-22
• 1.4 小結(jié)22-23
• 第2章 旋毛蟲硒蛋白 T 基因的表達(dá)與純化23-32
• 2.1 材料與方法23-28
• 2.2 結(jié)果28-31
• 2.3 討論31
• 2.4 小結(jié)31-32
• 第3章 旋毛蟲硒蛋白 T 單克隆抗體的制備與純化32-38
• 3.1 材料與方法32-35
• 3.2 結(jié)果35-37
• 3.3 討論37
• 3.4 小結(jié)37-38
• 第4章 單克隆抗體抗肝癌 H7402 效果的檢測38-43
• 4.1 材料與方法38-39
• 4.2 結(jié)果39-40
• 4.3 討論40-41
• 4.4 小結(jié)41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 導(dǎo)師簡介50-51
• 作者簡介及科研成果51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：旋毛蟲與肝癌H7402相關(guān)抗原蛋白的單克隆抗體制備及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：367673