本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：輪狀病毒(Rotavirus, RV)是引起人類、哺乳動物類、禽類病毒性腹瀉的主要病原體。幾乎全世界每一個兒童都被RV感染過,每年有大量兒童因為感染RV致死。由于RV所導(dǎo)致的高發(fā)病率及對兒童健康的嚴重危害,RV疫苗的使用和發(fā)展也引起多方關(guān)注。由于RV型別眾多,研發(fā)具有廣泛免疫保護作用的疫苗帶來較大困難。 現(xiàn)階段的RV基因重配減毒活疫苗在安全性方面存在著很多不足,例如接種者使用后出現(xiàn)腸套疊癥狀,疫苗被豬環(huán)狀病毒污染等情況的發(fā)生。其次,在免疫保護性方面也還存在許多不足。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和對基因工程疫苗研究的不斷深入,利用基因工程技術(shù)開發(fā)新疫苗是當前解決這個問題的較好途徑之一。 作為RV的組抗原蛋白,VP6蛋白高度保守,能夠產(chǎn)生交叉保護性,而且在RV中含量最為豐富,占病毒結(jié)構(gòu)蛋白總量的39%。VP4和VP7則可以誘發(fā)機體產(chǎn)生特異性的中和抗體。本研究用基因重組技術(shù),將3個VP7高保守性的抗原表位G[1]142,G[4]208,G[2]87插入VP6載體蛋白的表面,在大腸桿菌細胞中表達,研究重組嵌合蛋白免疫學(xué)特性。結(jié)果顯示,所表達重組嵌合蛋白可與抗重組VP6載體蛋白免疫豚鼠血清抗體和抗RV Wa和抗SA11反應(yīng)：重組嵌合蛋白免疫豚鼠血清抗體可與VP6載體蛋白反應(yīng),可與Wa和SA11病毒VP6和VP7反應(yīng),具有中和Wa和SAl1病毒在MA104細胞上的感染性作用。重組嵌合蛋白上的VP7抗原表位,可提高VP6載體蛋白的抗原反應(yīng)性和免疫原性。本研究結(jié)果對發(fā)展新型RV重組疫苗具有潛在的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：RV VP6載體蛋白 VP7抗原表位 嵌合疫苗
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-14
• 實驗材料及方法14-36
• 一、實驗材料14-17
• 1. 主要儀器14-15
• 2. 主要試劑15
• 3. 實驗動物，菌毒株，載體質(zhì)粒和哺乳動物培養(yǎng)細胞15-17
• 二、實驗方法17-36
• 1. pETP6重組質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定17-20
• 2. pETP6v載體質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定20-28
• 3. 含有VP6蛋白基因pETP6F載體質(zhì)粒的構(gòu)建28
• 4. 攜帶RV VP7抗原表位重組表達質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定28-31
• 5. 重組VP6載體蛋白和重組嵌合蛋白VP6/EP的表達及檢測31
• 6. 重組載體蛋白(rVP6F)和重組嵌合蛋白的純化31
• 7. Bradford法測定純化蛋白的濃度31-32
• 8. MA104細胞復(fù)蘇與傳代培養(yǎng)32-33
• 9. RV增殖33
• 10. RV的純化與濃縮33
• 11. 微量滴定法測定SAll與Wa病毒感染性滴度33-34
• 12. 動物免疫及血清抗體的制備34
• 13. 重組VP6載體蛋白和重組嵌合蛋白免疫血清中和抗體效價的檢測34-35
• 14. Western blot檢測純化的重組嵌合蛋白的免疫原性35-36
• 結(jié)果與分析36-47
• 1. 質(zhì)粒的構(gòu)建36-39
• 2. 重組嵌合蛋白的表達及PAGE檢測39-40
• 3. 重組嵌合蛋白的純化及PAGE檢測40-41
• 4. 純化蛋白濃度的測定41-42
• 5. RV感染性滴度的檢測42
• 6. 免疫動物血清中和抗體檢測42-43
• 7 Western blot檢測重組嵌合蛋白的免疫原性43-47
• 討論47-49
• 小結(jié)49-50
• 參考文獻50-54
• 附錄54-71
• (一) 縮略詞54-56
• (二) 主要溶液配方56-63
• (三) 主要實驗方法63-69
• (四) TB-Chen株VP6編碼基因核苷酸序列及氨基酸序列69-70
• (五) TB-Chen株VP6F載體編碼基因核苷酸序列70-71
• 致謝71-72
• 研究生簡歷72-73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 陳元鼎;劉曉;熊新宇;曹志亮;文喻玲;趙慶歡;余洋;尹興曉;李傳印;范耀春;;A組人輪狀病毒全基因組克隆和基因型分析[J];中國生物工程雜志;2008年02期

2 江保明;楊曉明;徐德啟;;輪狀病毒疫苗的現(xiàn)狀和發(fā)展動向[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年02期

3 潘小霞;張順;陳元鼎;;輪狀病毒VP_6蛋白免疫學(xué)研究進展[J];中國疫苗和免疫;2011年02期

4 段招軍;;人A組輪狀病毒疫苗研究進展[J];中國新藥雜志;2012年10期

  本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：367764